Page 98 - 《中国药科大学学报》2026年第1期

92 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2026, 57(1): 90 − 97 第 57 卷

趋 化 因 子 配 体 10（ C-X-C motif chemokine ligand 2.3 心肌病理检测
10， CXCL10） 、 白 细 胞 介 素 -6（ interleukin-6， IL-6） 各组随机取 6 只小鼠，麻醉处死，收集心肌组
（英国 Abcam 公司）。 织，用 4% 多聚甲醛固定后石蜡包埋，并切成 5 μm
1.2 仪 器 厚的切片，HE 染色后镜下观察心肌病理变化，并进
Vevo 770 超声影像系统（加拿大 VisualSonics 行病理评分，评分标准为：0—正常结构，无病理改
公司）；CX53 光学显微镜（日本奥利巴斯公司）； 变；1—轻度病变（<25% 视野面积受累）；2—中度病
Leica EM FC7 超微切片仪（德国徕卡公司）；JEOL 变 （ 25%~50% 视 野 面 积 受 累 ） ； 3—重 度 病 变
JEM 2000 EX 透射电子显微镜（捷欧路科贸有限公 （>50% 视野面积受累）。
司）；BD Accuri C6 流式细胞仪（美国 BD 公司）； 2.4 心肌细胞线粒体超微结构的观察
TM
Nikon A1R 激光共聚焦显微镜（日本尼康公司）； 取“2.3”项中剩余的部分心肌组织标本，用
Trans-Blot Turbo 蛋白电泳仪（美国伯乐公司）。 2.5% 戊二醛固定后，再用 1% 四氧化锇在 4 ℃ 下固
1.3 动 物 定 60 min，PBS 洗涤标本后进行脱水处理。用超微
SPF 级雄性 C57BL/6J 小鼠（体质量 23~25 g）， 切片仪将组织标本切成 80 nm 厚的超薄切片，用饱
12 只，购自浙江大学国际健康医学研究院，生产许 和醋酸铀酰和柠檬酸铅染色切片，随后用透射电子

可证号：SCXK（浙）2023-0008；SPF 级雄性肌钙蛋 显微镜观察心肌细胞线粒体超微结构。
白 T（cTnT）R141W 转基因 DCM 小鼠（体质量 23~ 2.5 心肌细胞线粒体膜电位未降低细胞占比的检测
25 g），60 只，购自北京维通达生物技术有限公司， 各组取剩余的 6 只小鼠，腹腔注射戊巴比妥钠
（100 mg/kg）麻醉处死小鼠，收集心肌组织，利用单
生产许可证号：SCXK（京）2023-0014。所有动物
细胞悬液分离试剂盒分离获得心肌组织单细胞悬
实验均获得本院动物伦理委员会批准（批准编号
液，加入 JC-1 染液 500 μL 孵育单细胞悬液 20 min，
202412005）。
离心收集细胞沉淀，利用 JC-1 染液重悬细胞沉淀，
2 方 法 通过流式细胞仪检测心肌细胞线粒体膜电位未降
低细胞占比。
2.1 动物分组及处理
2.6 心 肌 组 织 活 性 氧 （ reactive oxygen species，
60 只 SPF 级雄性 cTnT R141W 转基因 DCM
ROS）含量及 ATP 含量的检测
小鼠随机分为 DCM 组、Atr-I 低剂量组、Atr-I 高剂
取“2.5”项剩余的心肌组织研磨成匀浆，稀释
量组、卡托普利组、Atr-I 高剂量+cGAS/STING 通
匀浆后将其与 DCFH-DA 荧光探针在 37 ℃ 下染
路激活剂（DMXAA）组，每组 12 只。另取 12 只
色 20 min。用激光共聚焦显微镜观察 ROS 荧光变
C57BL/6J 雄性小鼠作为对照组。Atr-I 低、高剂量
化，ImageJ 软件测定 ROS 含量。按照 ATP 含量测
组小鼠分别灌胃 60 mg/kg、240 mg/kg Atr-I（生理盐
定试剂盒步骤说明检测心肌组织 ATP 含量。
[7]
水配制） ；卡托普利组小鼠灌胃 0.01 g/kg 卡托普利
2.7 心 肌 组 织 MFN2、 DRP1、 cGAS、 STING、
[8]
（生理盐水配制） ；Atr-I 高剂量+DMXAA 组小鼠
IFN-β、CXCL10、IL-6 蛋白检测
灌胃 240 mg/kg Atr-I（生理盐水配制）和 37.5 mg/kg
取“2.5”项中剩余的心肌组织，RIPA 裂解缓冲
DMXAA（二甲基亚砜助溶后再用生理盐水配制） ；
[9]
液提取心肌组织总蛋白，BCA 法评估蛋白质浓度，
DCM 组、对照组小鼠灌胃等体积的生理盐水。每 取蛋白质样品 40 μg 经 10% SDS-PAGE 分离，然后
天灌胃给药 1 次，持续 8 周。 转移到聚偏二氟乙烯膜上。在室温下用 5% 脱脂牛
2.2 小鼠左心功能相关指标的检测 奶封闭膜 1 h 以阻断非特异性结合位点，然后将膜
末次给药 24 h 后，使用超声影像系统对所有 与一抗 MFN2（1∶3 000）、DRP1（1∶4 000）、cGAS（1∶
小鼠进行经胸超声心动图分析，测量小鼠左室收 2 000）、GAPDH（1∶3 000）、STING（1∶3 000）、IFN-β
缩末期内径（left ventricular end-systolic dimension， （ 1∶3 000） 、 CXCL10（ 1∶6 000） 、 IL-6（ 1∶2 000） 在
LVESD） 、 左 室 射 血 分 数 （ left ventricular ejection 4 °C 下孵育过夜，第 2 天，再与二抗（1∶4 000）在室
fraction， LVEF） 和 左 室 缩 短 分 数 （ left ventricular 温下共孵育 1 h。最后，获取印迹并通过 Image
shortening fraction，LVSF）的变化。 Lab 软件扫描灰度值。