Page 81 - 《中国药科大学学报》2026年第1期

第 57 卷第 1 期 葛 姮，等：五氟利多靶向 HSPA6 抑制黑色素瘤生长的作用研究 75
A A375 B B16

0 μmol/L 4 μmol/L 0 μmol/L 4 μmol/L
HSPA6 2 μmol/L 6 μmol/L HSPA6 2 μmol/L 6 μmol/L
Relative expression levels ** ** ** Relative expression levels ** ** ** **
p21 6.0 ** p21 6.0 ** ** **
4.0
4.0
p53 2.0 * ** * p53 2.0 ** *

β-actin 0 p21 p53 β-actin 0 p21 p53
0 2 4 6 HSPA6 0 2 4 6 HSPA6
c(Penfluridol)/(μmol/L) c(Penfluridol)/(μmol/L)
Figure 5 Effect of penfluridol on the expression levels of HSPA6, p53 and p21 in melanoma cells( x ± s, n=3)
A: Western blot was used to detect the expression of HSPA6, p53 and p21 in A375 cells; B: Western blot was used to detect the expression of
HSPA6, p53 and p21 in B16 cells
*P < 0.05, **P < 0.01 vs 0 µmol/L group
五氟利多的浓度升高而升高（图 5）。这一结果提 抑制体内黑色素瘤生长，而 HSPA6 沉默能够逆转
示，五氟利多可以靶向结合 HSPA6 蛋白，进而增强 五氟利多的抗肿瘤效应。
细胞内 p53/p21 信号分子的水平。
4 讨 论
3.6 五氟利多诱导的细胞凋亡和周期阻滞效应依
赖于 HSPA6 的存在 本研究利用 DARTS 技术鉴定出五氟利多在
为了进一步确定 HSPA6 的表达水平与五氟利 黑色素瘤中的一个潜在新靶点——HSPA6。质谱
多抑制黑色素瘤细胞增殖的关系，本研究通过调控 分析显示，HSPA6 是差异最显著的候选蛋白，其相
HSPA6 表达水平，验证其对 A375 和 B16 细胞存活 对分子质量（70 kD）与 SDS-PAGE 观测到的差异条
及凋亡的影响。结果显示：过表达 HSPA6 可显著 带位置相吻合；分子对接模拟及 SPR 实时结合分析
抑制 A375 和 B16 细胞存活率（图 6-A），而敲低 均证实了五氟利多能与 HSPA6 蛋白结合。HSPA6
HSPA6 则明显增强细胞存活率（图 6-B）。同时， 属于热休克蛋白 70（HSP70）家族，已有研究报道其
敲低 HSPA6 也可逆转五氟利多介导的 A375 和 参与调控蛋白质折叠稳态和线粒体功能 。值得注
[15]
B16 细胞内升高的 p53 和 p21 表达水平（图 6-C）。 意的是，本研究发现五氟利多处理可显著上调
进一步的流式细胞仪测定结果提示：敲低 HSPA6 HSPA6 表达，敲低 HSPA6 能显著逆转五氟利多诱
还显著降低了五氟利多介导的 A375 和 B16 细胞凋 导的细胞凋亡和 G 期阻滞，这进一步明确 HSPA6
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亡（五氟利多+si-NC 组的 A375 和 B16 细胞凋亡率 是介导五氟利多抗肿瘤效应的关键靶点。虽然本
分别是 39.0% 和 23.1%，五氟利多+si-HSPA6 组的 研究尚未阐明五氟利多上调 HSPA6 表达的具体机
A375 和 B16 细胞凋亡率分别是 10.1% 和 11.3%） 制，但有文献报道五氟利多能上调同为 HSP70 家族
（图 6-D，图 6-E）。另外，敲低 HSPA6 也明显逆转 成员的 GRP78 蛋白表达 。本研究推测五氟利多
[16]
了五氟利多诱导的 G 期周期阻滞（图 6-F，图 6- 可能通过类似的途径调控了 HSPA6 的表达，但仍
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G）。以上结果表明，五氟利多诱发的黑色素瘤细胞 需进一步的实验验证。
凋亡和周期阻滞依赖于 HSPA6 的存在。 此外，本研究还揭示了 HSPA6 与经典肿瘤抑
3.7 HSPA6 基因沉默能逆转五氟利多引起的黑色 制通路 p53/p21 轴的功能关联。实验数据显示，五
素瘤生长抑制 氟利多在上调 HSPA6 表达的同时，也同步激活了
为评估五氟利多及利用小干扰 RNA 技术沉 p53 及其下游效应分子 p21 的表达。这种协同调控
默 HSPA6 基因在黑色素瘤中的作用，本研究构建 可能源于 HSPA6 作为分子伴侣的独特功能——已
了 C57BL/6J 小鼠 B16 皮下移植瘤模型。实验结果 有研究表明，HSPA 家族成员可通过维持 p53 蛋白
[17]
显示，五氟利多处理显著抑制了肿瘤生长，而 si- 的构象稳定性来增强其转录活性 。本研究中观察
HSPA6 与五氟利多的联合处理组小鼠的肿瘤体积 到的 p21 表达上调，正是 p53 经典信号通路激活的
明显大于单独应用五氟利多处理的小鼠肿瘤体积 标志性事件：活化的 p53 通过结合 p21 启动子区，
（图 7）。这一结果提示五氟利多可通过诱导细胞凋 诱导其表达并抑制 CDK4/cyclin D1 复合物形成 ，
[18]
亡和周期阻滞等方式抑制黑色素瘤细胞增殖，进而 这与本研究在细胞周期实验中观察到的 G 期阻滞
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