Page 79 - 《中国药科大学学报》2026年第1期
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第 57 卷第 1 期 葛 姮，等：五氟利多靶向 HSPA6 抑制黑色素瘤生长的作用研究 73
A
0 μmol/L 2 μmol/L 4 μmol/L 6 μmol/L
A375
B16
B
0 μmol/L 2 μmol/L 4 μmol/L 6 μmol/L 30
10 5 0.4% 2.6% 10 5 0.8% 1.0% 10 5 2.7% 6.6% 10 5 1.4% 2.2% **
10 4 10 4 10 4 10 4 20 **
A375 PI 10 3 10 3 10 3 10 3 Apoptotic cells/% **
010 2 010 2 010 2 010 2 10
1.0% 11.0% 9.3% 22.2%
010 2 10 3 10 4 10 5 010 2 10 3 10 4 10 5 010 2 10 3 10 4 10 5 010 2 10 3 10 4 10 5 0
Annexin-V FITC 0 2 4 6
C c(Penfluridol)/(μmol/L)
0 μmol/L 2 μmol/L 4 μmol/L 6 μmol/L 40
10 5 0.8% 0.4% 10 5 1.8% 3.2% 10 5 0.2% 8.2% 10 5 0.0% 8.2% **
10 4 10 4 10 4 10 4 30
B16 PI 10 3 10 3 10 3 10 3 Apoptotic cells/% 20
010 2 010 2 010 2 010 2 10 **
1.4% 2.5% 15.5% 29.2%
010 2 10 3 10 4 10 5 010 2 10 3 10 4 10 5 010 2 10 3 10 4 10 5 010 2 10 3 10 4 10 5 0
Annexin-V FITC 0 2 4 6
c(Penfluridol)/(μmol/L)
D A375 0 μmol/L 4 μmol/L E B16 0 μmol/L 4 μmol/L
Bcl-2 6.0 2 μmol/L 6 μmol/L Bcl-2 6.0 2 μmol/L 6 μmol/L
**
Bax 4.0 ** ** Bax 4.0 **
Caspase3 Relative expression levels ** ** Caspase3 Relative expression levels ** **
Cleaved- 2.0 ** Cleaved- 2.0 **
caspase3 ** ** ** caspase3 ** ** ** ** **
β-actin 0 Bcl-2 Bax Cleaved- β-actin 0 Bcl-2 Bax Cleaved-
0 2 4 6 Caspase3 caspase3 0 2 4 6 Caspase3 caspase3
c(Penfluridol)/(μmol/L) c(Penfluridol)/(μmol/L)
Figure 3 Effect of penfluridol on apoptosis of A375 and B16 cells( x ± s, n=3)
A: Apoptosis morphological changes of penfluridol-treated cell nuclei tested by Hoechst 33342 fluorescent staining (Scale bar=50 µm); B, C: Flow
cytometry was applied to assay the apoptosis of penfluridol-treated A375 and B16 cells; D, E: Western blot was used to detect the expression of
apoptosis-related proteins Bcl-2, Bax, caspase-3 and cleaved caspase-3
**P < 0.01 vs 0 µmol/L group
对照组蛋白数：863 vs 728，FDR < 0.05）（图 4-B）。 也提示五氟利多能与 HSPA6 结合，亲和力常数 K D
–6
基于质谱“Score Sequest HT”排序及相对分子质量 为 5.58×10 （图 4-H, 图 4-I）。以上结果证实了五氟
筛选，最终选择 HSPA6 进行后续研究（图 4-C）。 利多可与 HSPA6 蛋白特异性结合。
利用 GEPIA 网站（http://gepia2.cancer-pku.cn/# 3.5 五氟利多上调 HSPA6、p53 和 p21 的表达
survival）分析 TCGA 数据发现，HSPA6 高表达的黑 已有文献表明 HSPA6 可通过 p53/p21 通路调
色素瘤患者的中位生存期更长（图 4-D）。同时，分 控肿瘤细胞的凋亡过程 。本研究对五氟利多处理
[14]
子对接结果显示，五氟利多通过氢键嵌入 HSPA6 后的 A375 和 B16 细胞内 p53 和 p21 的含量进行了
功能口袋（图 4-E 至图 4-G）。此外，SPR 实验结果 检测。结果显示，和 HSPA6 一致，二者表达水平随
