Page 105 - 《中国药科大学学报》2025年第5期

第 56 卷第 5 期 刘欣娜，等：基于多组学分析的多囊卵巢综合征生物标志物及其机制 637

肽段以 0.1% 甲酸复溶，经 ACQUITY UPLC student’s t test），P<0.05 被认为具有统计学意义。
M-Class 系统分离（C 柱，75 μm×250 mm，1.7 μm； 3 结 果
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1
流速 300 nL/min）。流动相 A 为含 0.1% 甲酸的水
溶液，流动相 B 为含 0.1% 甲酸的乙腈溶液。色谱 3.1 模型评价
梯度为：0~70 min（5% → 35% B），70~75 min（35% 本研究建立了来曲唑诱导的大鼠 PCOS 模型，
→ 90% B） ， 75~80 min（ 90% B） 。 采 用 Orbitrap 并通过表型和生化指标评价其有效性。结果显示，
Eclipse 质谱仪进行检测，采集模式为数据依赖采 来曲唑处理显著加快了大鼠体重的增长速度（图 1-A），
[12]
集，质量扫描范围为 m/z 100~2 000，碎裂方式为碰 与现有研究一致 。正常组大鼠呈现为规律的 4~5
撞诱导解离。 d 动情周期，阴道涂片细胞形态符合各周期阶段特
数 据 经 MSConvertGUI（ v3.0） 转 换 ， FragPipe 征 （图 1-B）；PCOS 组大鼠主要表现出动情周期紊
[4]
（v18.0）整合 MSFragger 检索 UniProt 大鼠数据库 乱，长期停滞于动情间期（图 1-C），动情周期阶段统
（2019 版）进行鉴定（www.uniprot.org/） 。差异表 计见补充材料图 S1。
[11]
达蛋白（differentially expressed proteins, DEPs）筛选 血清激素检测结果显示，PCOS 组大鼠睾酮、
标准为|log FC|>1 且 P<0.05；经 Metascape 平台进 促黄体生成素及促黄体生成素/促卵泡激素比值均
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行 GO/KEGG 富集分析（P<0.05）。 显著升高。同时，该组空腹胰岛素和胰岛素抵抗的
2.4 Quantitative PCR （qPCR）通路验证 稳态模型评估值升高，胰岛素敏感指数降低；促卵
取卵巢组织（n=8）混合为样本池后，提取总 泡激素水平下降，雌二醇未见显著变化（图 1-D）。PCOS
RNA。取 RNA 1.0 μg 经 HiScript Ⅲ qRT SuperMix 组卵巢体积及卵巢指数显著高于对照组（图 1-E）。
试剂盒逆转录为 cDNA。按 SYBR qPCR Master 卵巢组织学观察（HE 染色）显示，对照组卵巢结构
Mix 说明书进行检测：95 ℃ 预变性 15 min；40 个循 正常，可见新鲜黄体和各级发育卵泡；PCOS 组卵巢
环（95 ℃，10 s → 60 ℃，30 s）。以 GAPDH 为内参， 呈典型多囊样改变，表现为闭锁卵泡增多和黄体数
采用 2 −ΔΔCt 法计算目的基因相对表达量，引物序列 量的减少（图 1-F）。
见表 1。 上述结果表明，来曲唑诱导的 PCOS 大鼠模型
2.5 数据的统计分析 成功模拟了人类 PCOS 的核心特征，包括体重异常
除组学检测外，实验数据来源于 3 次独立的生物 增加、动情周期紊乱、高雄激素血症、胰岛素抵抗
学重复，以 x±s 表示。使用 Graph Prism 9 软件进行 及卵巢多囊样病理变化，为后续血清代谢物组学和
统计分析。组间比较采用独立样本 t 检验（unpaired PCOS 发病机制的探索提供了基础。

Table 1 Sequence information of qPCR primers
Gene Primer 5'→3' Reference sequence (accession No.)
CYP11A1 F AAGTATCCGTGATGTGGG NM_017286.3
R TCATACAGTGTCGCCTTTTCT
CYP17A1 F TGGCTTTCCTGGTGCACAATC NM_012753.3
R TGAAAGTTGGTGTTCGGCTGAAG
HSD3B2 F CCCTGCTCTACTGGCTTGC NM_017265.4
R TCTGCTTGGCTTCCTCCC
AKR1C3 F GCAGAAGTGTAAGGATGCAGG XM_039095920.2
R CTGGTTGAGATAAACATGGCATTC
GAPDH F AACGACCCCTTCATTGACCT NM_017008.4
R TGACTGTGCCGTTGAACTTG
CYP19A1 F CACAAGTTAAGCCCGGTTGC NM_017085.3
R CTGGGAGCACGAACTGAGAG
STAR F GTCATCAGAGCTGAACACGG NM_031558.3
R TGGCGAACTCTATCTGGGTC
HSD17b12 F AATGTGCTTTCCATTTGCAAGGT NM_032066.2
R ATGCCACTGGCAGAGGAGATG