Page 95 - 《中国药科大学学报》2025年第4期
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第  56 卷第  4 期      李莹莹，等：丙酸钠缓解鼠柠檬酸杆菌诱导的小鼠结肠炎效果优于混合短链脂肪酸                                    491


               Table 2    Primer sequence of qPCR in mouse      酸钠（A-13.5, 42.187 5 mmol/L）及丁酸钠（B-5.18,
                   Gene               Sequence (5’-3’)          16.187 5 mmol/L），比较不同    pH  下丙酸钠和     SCFAs
                  GAPDH      F:TGGAATCCTGTGGCATCCATGAAAC
                                                                对  C.r.的 影 响 。 实 验 结 果 表 明 ， 丙 酸 钠 和 混 合
                             R:TAAAACGCAGCTCAGTAACAGTCCG
                                                                SCFAs 对  C.r.生长抑制效果较乙酸钠、丁酸钠更好
                  TNF-α      F:CCCTCACACTCAGATCATCTTCT
                                                                （图  1-A−1-C）。在   pH 7.0 和  pH 7.5 的条件下，两种
                             R:GCTACGACGTGGGCTACAG
                                                                剂量的丙酸钠都比混合              SCFAs 抑制   C.r.生长的
                  IL-6       F:GAGGATACCACTCCCAACAGACC
                             R:AAGTGCATCATCGTTGTTCAT            作用明显（图      1-B，1- C）。在   pH 4.8 条件下，高剂量
                  IL-17      F:CCACGTCACCCTGGACTCTC             组的丙酸钠抑制         C.r.生长的表现优于混合          SCFAs
                             R:CTCCGCATTGACACAGCG               （图  1-A）。总的来说，丙酸钠较混合             SCFAs 更能有
                  IL-22      F:TCCGAGGAGTCAGTGCTAAA
                                                                效抑制    C.r.生长。此外，丙酸钠还明显降低了                C.r.
                             R:AGAACGTCTTCCAGGGTGAA
                                                                定植毒力效应因子的表达（图             1-D, 1-E）。
                  Regγ3      F:T TCCTGTCCTCCATGATCAAAA
                                                                3.2    丙酸钠较混合     SCFAs 可明显缓解感染小鼠的
                             R:CATCCACCTCTGTTGGGTTCA
                                                                体重下降，并降低肠道排菌量
               2.7    CD4 Th 细胞分型检测                                  研究观察到小鼠在感染后体重减轻。然而，丙
                        +
                    在解剖小鼠取材当天，用             DMEM   高糖培养         酸钠和混合      SCFAs 干预后，小鼠体重减轻有一定的
               基将肠系膜淋巴结（MLNs）收集到              EP  管中，制备单        缓解（图    2-A）。根据图     2-A  结果显示，丙酸钠干预
               细胞悬液，cDMEM        缓冲液（FBS     和  DMEM, 1∶10）     效果优于混合短链脂肪酸。粪便细菌培养结果显
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               洗涤细胞沉淀两次并重悬。计数收集                      1×10 个     示，C.r.+Pro 和  C.r.+SCFAs 组的细菌排出量比         C.r.
               细胞，4 ℃    下与抗体孵育       30 min。cDMEM    洗涤细       组少，C.r.+Pro 组最少（图       2-B）。这些结果可初步
               胞沉淀物      2 次，丢弃上清液，用         2%  多聚甲醛    400    表明小鼠肠道感染模型的成功建立。同时，从小鼠

               μL  重悬细胞沉淀物，流式细胞上机检测                 MLNs 中      肠道排菌量来看，丙酸钠在缓解肠道感染中的表现
                                           +
                                    +
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                   +
               CD4 CD183 （Th1）、CD4 CD194 （Th2）、CD4 CD196    +   优于混合     SCFAs。

               （Th17）、CD4  CD25 （Treg）细胞。                       3.3    丙酸钠较混合    SCFAs 可明显减弱      C.r.结肠炎症
                           +
                                 +

               2.8    数据处理                                           结肠长度统计结果显示相较于对照组，C.r.组
                    所有实验至少重复           3 次，结果均以       Mean ±    小鼠的结肠长度显著缩短。丙酸钠干预后可使结
               SEM  表示，并使用      Prism 8 进行分析。根据数据结              肠长度增加，而混合         SCFAs 的干预没有改变小鼠感
               构，均值比较采用非配对           t 检验，单因素方差分析采              染后结肠长度（图        3-A）。远端结肠的        HE  染色结果
               用  Tukey 多 重 比 较 检 验 ， 双 因 素 方 差 分 析 采 用         显示，丙酸钠较混合         SCFAs 明显减少了小鼠感染后
               Tukey 多重比较检验，P<0.05 为有显著性。                       结肠黏膜下层的炎细胞浸润，减轻了黏膜损伤

                                                                （图  3-B）。qPCR  结果显示，C.r.+Pro 和     C.r.+SCFAs
               3    结 果
                                                                组小鼠结肠       TNF-α  和  IL-6 的表达明显低于        C.r.

               3.1    丙酸钠较混合     SCFAs 可明显影响      C.r.生长        组。但与     C.r.+SCFAs 组比较，C.r.+Pro 组中     TNF-α
                    当细菌达到一定数量并定植于肠道后才会引                         和  IL-6 的表达降低差异无统计学意义（图             3-C，3-D）。
               起肠道感染。因此，本研究首先在体外检测了丙酸                           结肠的短缩、结肠         HE  染色检测和结肠炎症因子表
               钠和短链脂肪酸对细菌生长和定植的影响。将                             达的升高表明小鼠肠道感染模型的成功建立。同
               C.r.（5×10  CFU）在不同    pH  的  LB  培养基中培养，         时，以上结果表示，相较于混合              SCFAs，丙酸钠具有
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               同时加入不同浓度的丙酸钠和短链脂肪酸。结果                            减轻   C.r.感染引起的结肠损伤的优势。

               表明，丙酸钠在       pH 4.8 条件下抑制细菌生长效果较                3.4    丙酸钠较混合     SCFAs 明显诱导增强小鼠肠黏
               好，且浓度大于        25 mmol/L  时抑制效果无显著差              膜屏障功能
               异。因此，使用丙酸钠浓度             8 和  25 mmol/L  进行后          抗菌肽（AMPs）是肠道黏液屏障的重要组成部
               续实验，按照丙酸钠体内外剂量之比计算使用                             分，已被证明具有抗菌活性，重组再生胰岛衍生蛋
               浓度，分别为       SCFAs（S-26.68, 83.375 mmol/L）、乙     白  3γ（Reg3γ）是重要的     AMPs 之一。白介素-22（IL-
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