Page 42 - 《中国药科大学学报》2025年第4期
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438                      学报   Journal of China Pharmaceutical University 2025, 56(4): 432 − 443  第 56 卷

               图  4) 被鉴定为能有效结合 GLI1-ZF 结构域（结合                   相比，BAS07019774 具有较低的相对分子质量
               自由能 ΔG = −8.2 kcal/mol） 。核磁共振弛豫速率                (253.3 vs 429.6 g/mol) ，更符合的 Lipinski 类药五规
                                        [44]
               (Rms) 分析表明，GlaB 的 B 环和异戊二烯基团通过                   则，预示其成药性更佳。其作为靶向 GLI1/2 的双
               氢键与 K350 侧链相互作用，并占据 ZF4-ZF5 间的                   重抑制剂，为克服 SMO 抑制剂耐药性提供了
               表面凹槽。值得注意的是，K340A/K350A 双点突变                     新策略。
               后会导致 GlaB 结合完全丧失，而单点突变仅部分                             近期   Giannini 等  [47]  以及康涅狄格大学研究
               削弱其亲和力，揭示了双位点协同结合机制。进一                           人员通过虚拟筛选，从一个包含 3 万个小分子的库
               步的药效学评估显示，GlaB 在体外能有效抑制                          中鉴定出一系列对 GLI1 具有高亲和力抑制作用的
               Hh/GLI 信号通路 (IC  约为 30 μmol/L)，其抑制强              8-羟基喹啉类化合物。其中，活性最优的化合物
                                  50
               度与   GANT61 相当。动物实验证实，皮下注射                       Cpd1（图  4）经  SPR  技术测得与      GLI1 蛋白的结合
               GlaB (75~100 μmol/kg) 可显著抑制 Hh 依赖性肿瘤             解离常数（K ）为       207 nmol/L。分子相互作用分析
                                                                           d
               的生长。作为研究较为广泛的多靶点 GLI1 抑制                         显示，Cpd1 通过氢键网络与 GLI1-ZF             结构域的
               剂，GlaB 可通过干扰 GLI1-DNA 相互作用抑制                     Thr243 和 Asp216 残基结合。在 Hh 依赖性细胞
               GLI1 活性，凝胶迁移实验 (EMSA) 测得该抑制作用                    模型（MEF    SUFU-/- ）中，Cpd1 对 GLI1 转录活性的抑制
               的 IC  约为 30 µmol/L。                              效力显著强于 GANT61（IC  = 1.5 ± 0.5 μmol/L vs
                                                                                         50
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                    澳大利亚茄胺 (solasodine，图      4) 是从茄属植物         4.5 ± 1.2 μmol/L），并能有效抑制原代髓母细胞瘤
               龙葵中分离的甾体生物碱，既往研究证实其可通过                           细胞的增殖（IC  = 4.4 μmol/L）。SPR         分析表明，
                                                                               50
               诱导细胞凋亡发挥显著的抗肿瘤作用，被探索用于                           Cpd1 并不阻止      GLI1 与  DNA  的结合，也不破坏
               多种癌症的干预。2023 年，Chen 等             [45]  首次揭示     GLI1 / DNA  的复合物，其极有可能通过与             GLI1 结
               solasodine 通过靶向 Hh/GLI1 信号通路抑制乳腺癌                合并诱导其特定的构象变化，从而抑制                  Gli1 的转录
               干细胞 (BCSCs) 活性，其机制涉及关键性标志物的                      功能。随后，Manetti 等      [48]  以  GlaB  为模板，通过药
               转录调控及与 GLI1 蛋白的特异性结合。细胞热位                        效团虚拟筛选也获得了喹啉类骨架先导化合物
               移分析 (CETSA) 发现，solasodine 处理可显著提高                SST0776（A375 细胞    IC  = 0.11 μmol/L）和化合物
                                                                                     50
               GLI1 蛋白在 45℃ 下的热稳定性，提示两者存在直                      SST0794（A375 细胞    IC  = 0.12 μmol/L）。该团队
                                                                                     50
               接结合。分子对接模拟进一步揭示，solasodine 与                     进一步对该类化合物进行结构简化，获得了非手性
               GLI1-ZF 结构域的 Thr243 和 Asp216 残基形成                衍生物 JC19（图     5） 。JC19 在低浓度下即表现出
                                                                                 [49]
               氢键网络，其结合模式与              GANT61 高度相似，为           强效抑制活性：在 NIH3T3 细胞中，0.5 μmol/L 的
               solasodine 的靶向特异性提供了结构生物学依据。                     JC19 即可抑制约 80% 的 GLI1/2 蛋白表达。其作
                    2024 年，来自北卡罗来纳州立大学的研究                       用特异性得到证实，对 77 种激酶无脱靶效应。机
               团队   [46]  在 JChem 化合物库中通过结构相似性                  制研究表明，JC19 通过减少 GLI1/2 在 PTCH1 启动
               搜索筛选出 52 个 GANT61 类似物。其中，化合                      子区的占据并抑制 GLI/DNA 复合物的形成来发挥
               物  BAS07019774  （ 图  4） 表 现 出 优 异 的 特 性 ： 在      功能。分子对接模拟揭示，JC19 与 GLI1-ZF 结构
               C3H10T1/2 细胞 Hh 通路激活测定中 IC  为 5.5                域形成多重相互作用：喹啉环的氮原子与 His351 的
                                                    50
               μmol/L；在 GLI 报告基因测定中，BAS07019774 具               主链形成氢键，C8 位的氧原子与 Arg354 的胍基
               有 抑制 GLI1 驱动的转录活性，IC  为 11.2 μmol/L。             产生 π-阳离子相互作用，甲氧基则与 Lys350 发
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               在细胞抗增殖实验中，BAS07019774 能显著降低                      生疏水接触。定点突变实验证实，His351Ala 与
               GLI 依赖性癌细胞的活力，其对肺癌 SK-MES-1                      Arg354Ala 突变可显著削弱 JC19 对 GLI1 活性的
               细胞的抑制活性 IC  = 9.3 μmol/L，但对 GLI 低                抑制。尤为重要的是，JC19 兼具优异的类药性（水
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               表 达 的  H1437  细 胞 无 显 著 作 用 。 分 子 对 接 预          溶性 >1 mg/mL，血浆稳定性 >90%）和显著的体内
               测 BAS07019774 结合于 GLI1 的 ZF4 结构域，与               抗肿瘤活性（25 mg/kg 剂量腹腔注射 12 天，肿瘤抑
               Arg348、His335 和 Glu334 形成氢键，可能阻碍                 制率达 70%），且未观察到显著肝蓄积毒性，凸显了
               GLI1 与 DNA 的结合。值得注意的是，与 GANT61                   其良好的临床转化前景。
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