Page 84 - 《渔业研究》2025年第6期

第 6 期 刘子竞等： 基于适配体的纳米金比色法快速检测河豚毒素 775

则无法对 AuNPs 起到保护作用，AuNPs 会发生聚 分，致使信号强度减弱，进而影响灵敏度；而孵育
沉；而当 Apt 浓度过高时，尽管能防止 AuNPs 聚 时间过长，不仅会降低实验效率，还可能引发非特
沉，但溶液中游离 Apt 会与 TTX 结合，从而影响 异性结合，增加背景噪声，影响结果的准确性。如
检测的准确性和灵敏度。如图 8 所示，当加入的 图 10 所 示 ， 当 Apt 与 TTX 孵 育 时 间 从 10 min
Apt 浓度从 20 nmol/L 提升至 80 nmol/L 时，A / 增加到 时，对应的 1 值显著增加，
620 20 min A 620 /A 52
A 52 1 值逐渐降低，且在其 80 nmol/L 时，溶液仍呈 这是因为吸附在 AuNPs 表面的 Apt 与 TTX 特异性
酒红色。当 Apt 浓度超过 80 nmol/L 后，A 620 /A 521 结合，导致 AuNPs 失去保护而发生聚沉；10 min
不再有明显变化，表明 Apt 已经过量。综上，选定 组与其他时间组的 A 620 /A 52 1 值存在显著性差异
80 nmol/L 作为最佳 Apt 添加浓度。 （P<0.05） ；20 min 后，该比值不再有明显变化并

b) a) 20 nmol/L 100 nmol/L 趋于稳定，且 时间组之间的 1 值
1.0 a 20~60 min A 620 /A 52
无显著性差异（P>0.05） ，表明孵育 20 min 后，
Apt 与 TTX 已充分结合。因此，将 20 min 选定为
b
0.8 c TTX 与 Apt 的最佳孵育时间。
A 620 /A 521 d

0.6 d a
0.7 b
c
d
0.4 A 620 /A 521 e e
20 40 60 80 100 120
Apt浓度/（nmol/L）Apt concentration 0.6
图 8 不同 Apt 浓度下 AuNPs 溶液的颜色变化（a）和
A 620 /A 52 值（b）
1
Fig. 8 Color change (a) and A 620 /A 521 ratio (b) of AuNPs 0.5
5 10 15 20 25 30 35
solutions at various Apt concentrations Apt孵育时间/min Apt incubation time

2.2.5 Apt 孵育时间的优化 图 9 不同 Apt 孵育时间下 AuNPs 溶液的 A 620 /A 52 值
1
Apt 与 AuNPs 的结合是一个动力学过程，需 Fig. 9 A 620 /A 521 ratios of AuNPs solutions at various
要一定的时间才能达到平衡。孵育时间过短，Apt Apt incubation times

无法充分吸附，导致颗粒间的分散性差，AuNPs 1.0
难以得到充分保护，进而影响检测结果的可靠性； a a
a a a
而孵育时间过长，不仅会增加反应时间，降低实验 0.9
效率，而且还可能会导致 AuNPs 发生非特异性聚 0.8
集。优化结合时间，既能确保 Apt 完整且均匀地吸 A 620 /A 521
附在 AuNPs 表面，又能提高实验效率，减少非特 0.7 b
异性结合，增强体系的稳定性和提高实验的重现
0.6
性。由图 9 可知，随着孵育时间从 5 min 延长至
25 min，对应的 A 620 /A 52 1 值逐渐减小，到 25 min 0.5
10 20 30 40 50 60 70
时趋于稳定，不再有明显变化，表明此时 Apt 已经
TTX与Apt的孵育时间/min
充分吸附在 AuNPs 表面。因此，将 25 min 选定为 Incubation time of TTX-Apt
Apt 的最佳孵育时间。 图 10 TTX 与 Apt 在不同孵育时间下 AuNPs 溶液的
1
2.2.6 TTX 与 Apt 孵育时间的优化 A 620 /A 52 值
TTX 与 Apt 孵育时间的优化对提高检测性能 Fig. 10 A 620 /A 521 ratios of AuNPs solutions at various
和实验可靠性至关重要。优化孵育时间的关键在于 incubation times of TTX-Apt
确保 Apt 与 TTX 充分结合，以提高传感器的灵敏 2.2.7 TTX 与 Apt 孵育温度的优化
度和检测限。若孵育时间过短，二者结合可能不充 由图 11 所示，当孵育温度为 10 ℃ 时，A 620 /A 521