Page 85 - 《渔业研究》2025年第6期

776 渔 业 研 究 第 47 卷

值达到最高，表明此温度下 Apt 与 TTX 的结合程 豚毒素的测定》中小鼠生物法，满足食品安全限量
度最高，这可能是因为 Apt 分子在低温环境中的三 要求。

维构象更为稳定，从而拥有与 TTX 更高的亲和 1.2
空白 Blank
力。基于此，将 10 ℃ 选定为 TTX 与 Apt 最佳孵 a TTX
1.0 a
育温度。 a
2.2.8 TTX 与 Apt 孵育 pH 值的优化 0.8
孵育时 pH 值的变化对 TTX 与 Apt 结合的影 A 620 /A 521 0.6 b b b b a a a
响如图 12 所示。当 pH 为 5~7 时，TTX 组 A /A
521
620
0.4
与空白组之间的差值远大于 pH 值为 8~9 的情况，
表明在微酸性环境中，Apt 与 TTX 的结合度更 0.2
高。当 pH 值为 8~9 时，TTX 组与空白组之间几乎 0
5 6 7 8 9
无差别，意味着 Apt 与 TTX 几乎未发生结合，这
pH
可能是因为 TTX 在碱性环境下发生水解、去质子
图 12 TTX 与 Apt 在不同孵育 pH 值下 AuNPs 溶液的
化或结构变化而变得不稳定，导致其与 Apt 的结合
A 620 /A 52 值
1
能力降低。当 pH 值为 5 时，TTX 组 A 620 /A 52 1 与空 Fig. 12 A 620 /A 521 ratios of AuNPs solutions at various
白组之间的差值最大，说明该环境下 Apt 与 TTX incubation pH values of TTX-Apt

结合度最高。因此，选择 TXX 与 Apt 的最佳孵育
1.1
pH 值为 5。
y=0.636 70+0.001 18x
1.2 1.0 R =0.995 7
2
a 0.9
a
1.0 b A 620 /A 521 0.8
A 620 /A 521 c c

0.7
0.8
0.6
0 50 100 150 200 250 300 350
TTX浓度/（ng/mL）TTX concentration
0.6
10 15 20 25 30 35
图 13 TTX 浓度与 AuNPs 溶液 A 620 /A 52 值的线性关系
1
TTX与Apt孵育温度/℃
Incubation temperature of TTX-Apt Fig. 13 Linear relationship between TTX concentration
图 11 TTX 与 Apt 在不同孵育温度下 AuNPs 溶液的 and A 620 /A 521 ratio of AuNPs solutions
A 620 /A 52 值 2.4 特异性分析
1
Fig. 11 A 620 /A 521 ratios of AuNPs solutions at various 对 STX、TTX、OA 三种海洋毒素与 Apt 的结
incubation temperatures of TTX-Apt 合进行特异性分析，检测结果如图 所示。空白
14
2.3 线性范围与检测限 组、OA 组和 STX 三组的 A 620 /A 52 1 值与 TTX 组、混
如 图 13 所 示 ， A /A 1 值 在 TTX 浓 度 在 合组之间的差异极显著（P<0.01） ；空白组、OA 组
620 52
2
19.53~312.5 ng/mL 范围内呈良好的线性关系，R = 和 STX 组的 A 620 /A 52 1 值无显著差异（P>0.05）；TTX
0.995 7， 线 性 回 归 方 程 为 y= 0.636 70+0.001 18x， 组、混合组的 A 620 /A 52 1 值无显著差异（P>0.05） 。
检测限为 12.97 ng/mL。与方力等 [37] 建立的 2D- 结果表明该方法在对 TTX 进行检测时，具备良好
LC-MS 的检测限 0.3 ng/mL、Sato 等 [38] 利用家兔 的特异性。
制备的 TTX 及其多种衍生物的多克隆抗原建立 2.5 加标回收实验
的酶联免疫法中的检测限 1 ng/mL 和 Huang 等 [39] 为评估 Apt-AuNPs 比色法测定 TTX 的准确
建立的多支纳米金免疫层析试纸条中的检测限 性，向无毒鱼肉中添加 TTX 标准溶液进行加标实
9.5 ng/mL 对比，本方法灵敏度较低，但远高于食 验，结果如表 1 所示，此方法对鱼肉样品中的加标
品安全国家标准 GB 5009.206—2016《水产品中河 回收率为 104.2%~108.4%；相对标准偏差（Relative