Page 81 - 《渔业研究》2025年第6期

772 渔 业 研 究 第 47 卷

拌，直至溶液颜色变为酒红色，再继续加热搅拌 30 μL 80 nmol/L Apt，在室温下分别孵育 5、10、
15 min 后，停止加热；在磁力搅拌作用下，使溶液 15、20、25、30 min 后，加入 50 μL 去离子水，最
冷却至室温，补充去离子水至溶液体积为 300 mL， 后加入 30 μL 300 mmol/L NaCl 溶液，在室温孵育
装入棕色玻璃试剂瓶中，再放入 4 ℃ 冰箱中保存 10 min 后，扫描并记录 AuNPs 溶液的 A 62 0 和 A 521
备用。 数值。
1.2.2 AuNPs 的表征 6）TTX 与 Apt 孵育时间的优化
取 20 μL AuNPs 溶液，滴在碳膜铜网上，放 向酶标板每孔中加入 90 μL AuNPs，再加入
置 3~5 min。随后，用滤纸吸去多余的液体。接 30 μL 80 nmol/L Apt，室温孵育 25 min，再加入
着，将质量分数为 2% 的磷钨酸滴在碳网上，放置 50 μL 浓度为 1 μg/mL 的 TTX 标准工作液，分别孵
1~2 min，再用滤纸吸去多余的液体。碳网在室温 育 10、20、30、40、50、60 min。最后，加入 30 μL
下放置干燥后，使用透射电子显微镜（Transmission 浓度为 300 mmol/L 的 NaCl 溶液，在室温下孵育
electron microscope，TEM）进行观察并采集图像， 10 min 后，扫描并记录 AuNPs 溶液的 A 62 0 和 A 521
以作分析。使用多功能酶标仪对 AuNPs 进行紫外 数值。
表征，扫描 AuNPs 在 400~800 nm 可见光范围内的 7）TTX 与 Apt 孵育温度的优化
紫外吸收光谱，并记录其最大吸收峰的波长。 向酶标板每孔中加入 90 μL AuNPs，再加入
1.2.3 检测条件优化 30 μL 80 nmol/L Apt，室温孵育 25 min，再加入
1）AuNPs 体积的优化 50 μL 1 μg/mL 的 TTX 标准工作液，分别在 10、15、
依次向酶标板每孔中加入 70、90、110、130、 20、25、30 ℃ 下恒温孵育 20 min。最后，加入 30 μL
150 μL AuNPs，再加入 80 μL 去离子水，最后加 浓度为 300 mmol/L 的 NaCl 溶液，在室温下孵育
入 30 μL 300 mmol/L 的 NaCl 溶液（使 AuNPs 在溶 10 min 后，扫描并记录 AuNPs 溶液的 A 62 0 和 A 521
液中的体积占比依次为 38.9%、45.0%、50.0%、 数值。
54.2%、 57.7%） ， 肉 眼 观 察 AuNPs 溶 液 颜 色 的 8）TTX 与 Apt 孵育 pH 值的优化
变化。 向酶标板每孔中加入 90 μL AuNPs，再加入
2）NaCl 浓度的优化 30 μL 80nmol/L Apt，室温孵育 25 min，再加入
向酶标板每孔中加入 90 μL AuNPs 和 80 μL 去 50 μL 1 μg/mL 的 TTX 标准工作液（空白组加入去
离子水，再分别加入 30 μL 浓度为 0、100、200、300、 离子水） ，并用 1‰乙酸溶液和 10 mmol/L NaOH
400、500 mmol/L NaCl 溶液。室温孵育 30 min， 溶液分别调节 pH 至 5、6、7、8、9，于 10 ℃ 下恒温
肉眼观察 AuNPs 溶液颜色的变化，并在多功能酶 孵育 20 min。最后，加入 30 μL 浓度为 300 mmol/L
标仪下扫描 400~800 nm 范围的紫外可见吸收光 的 NaCl 溶液，在室温下孵育 10 min 后，扫描并记
谱，记录 A 62 0 和 A 52 1 数值。 录 AuNPs 溶液的 A 62 0 和 A 52 1 数值。
3）NaCl 反应时间的优化 1.2.4 Apt-AuNPs 比色法检测 TTX
向酶标板每孔中加入 90 μL AuNPs 和 80 μL 去 将 Apt 在 6 000 r/min 条 件 下 离 心 1 min 后 ，
离子水，再加入 300 mmol/L NaCl 溶液于室温下孵 用 TE 缓冲液溶解至 10 μmol/L，放入 95 ℃ 金属浴
育，之后每隔 2 min 扫描并记录 AuNPs 溶液的 中加热 10 min 后，取出放在冰上迅速降至室温，
A 62 0 和 A 52 1 数值。 再用去离子水稀释至 80 nmol/L。向酶标板的每孔
4）Apt 浓度的优化 中加入 90 μL AuNPs 和 30 μL 80 nmol/L 的 Apt 孵
向酶标板每孔中加入 90 μL AuNPs，再分别加 育 25 min 后，再加入 50 μL 不同浓度的 TTX 溶液
入 30 μL 不同浓度（20、40、60、80、100 nmol/L） 孵 育 20 min， 向 每 孔 加 入 30 μL 300 mmol/L 的
Apt 溶液，室温孵育 30 min 后加入 50 μL 去离子 NaCl 溶液，待充分反应后，先用肉眼观察各孔溶
水，最后加入 30 μL 300 mmol/L NaCl 溶液，在室 液的颜色变化情况。然后，使用多功能酶标仪扫描
温 孵 育 10 min 后 ， 扫 描 并 记 录 AuNPs 溶 液 的 各孔溶液在 400~800 nm 范围内的紫外可见吸收光
A 62 0 和 A 52 1 数值。 谱 ， 并 记 录 A 620 /A 52 1 值 。 以 TTX 浓 度 （ 19.53、
5）Apt 孵育时间的优化 39.06、78.13、156.25、312.50 ng/mL）为横坐标，
向酶标板每孔中加入 90 μL AuNPs，再加入 以对应的 A 620 /A 52 1 值为纵坐标建立标准曲线。检测