Page 116 - 《渔业研究》2025年第5期

第 5 期 葛 辉等： 大黄鱼源锥体虫荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用 657

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普通 PCR 技术的最低检测限（1.6×10 拷贝/µL） [18] 。 可能为虫体提供了适宜的生存条件。虫体在这些器
本研究建立的方法灵敏度下限介于 2.5~25 拷贝/µL， 官的大量聚集，一方面会直接破坏红细胞引发贫
中间浓度的检出能力还需进一步验证，这种高灵敏 血，另一方面可能通过激发过度免疫反应或抑制免
度特性使其能够在感染早期（虫体尚未大量增殖 疫功能而导致器官损伤 [19] ，这一发现为解析锥体
时）准确检出，为锥体虫病的早发现、早干预提供 虫的致病机制提供了重要线索，同时提示心脏和脾
了关键技术支撑，对于减少养殖损失具有重要意义。 脏可能是锥体虫感染的主要病理损伤靶器官，为后

表 2 其他养殖鱼类锥体虫检出情况 续病理组织学研究指明了方向。尤为重要的是，本
Tab. 2 Detection of Trypanosoma spp. in other cultured 研究的组织分布结果为临床采样提供了直接、关键
fish species 的实践指导。在早期或微量感染阶段，选择病原富
检测组织 共检测条数 检出次数 检出率/% 集度高的组织进行检测是提高检出率的关键。本实
鱼类样品
Fish sample Tissue Total sampled test Detection Detection
testing entries frequency rate 验证实，心脏和脾脏中的锥体虫载量均显著高于其
心脏 20 1 5.0 他组织，甚至高于血液。因此，对于临床疑似感染
鲻鱼
Mugil 脾脏 20 1 5.0 个体，尤其是目标为早期筛查时，应优先考虑采集
cephalus
血液 20 0 — 心脏或脾脏组织进行检测，其次再考虑血液样本。
心脏 12 1 8.3 这种基于病原组织趋向性的靶向采样策略，可极大
真鲷
Pagrus 脾脏 12 1 8.3 提升监测的敏感性和早期诊断的准确性，为大黄鱼
major
血液 12 0 — 苗种筛选和精准药物干预奠定基础。

此外，本研究分析了大黄鱼可能的传播途径，
表 3 非鱼类样品的 Ct 值及检出情况
发现大黄鱼黏液中存在一定量的锥体虫，为解析其
Tab. 3 Ct values and detection status of non-fish samples
传播路径提供了重要线索。鱼类黏液作为体表防御
Ct 值
检测次数 检出次数 检出率/%
非鱼类样品 （均值） 的关键组成部分，同时也是病原体传播的潜在载
Non-fish samples Number of Detection Average Ct Detection
tests frequency rate 体，其富含的蛋白质、多糖等物质可成为病原体的
value
网衣 附着位点，促进病原体在宿主间的传播 [20-21] 。群居
Netting 12 2 37.0 16.7
鱼类的相互摩擦、追逐等行为会加速黏液交换，进
悬浮物
Suspensa materia 12 0 — — 一步促进病原体传播 [22] 。值得注意的是，本研究
龙须菜
Gracilaria 6 0 — — 在同养殖区域的非生物表面（如网衣）及多种共生
lemaneiformis
生物（包括裙带菜、牡蛎、鲻鱼、真鲷）中均检测
裙带菜
Undaria pinnatifida 15 14 30.5 93.3 到锥体虫，但病原含量较低。这更可能是大黄鱼黏
养殖水体 液中的锥体虫通过水体附着或沾染于这些物体及生
Aquacultural water 9 0 — —
物体表的结果，而非后者对锥体虫易感或已形成感
福建牡蛎
Crassostrea 6 1 34.0 17.0 染。不过，即使是短暂的附着状态，它们与大黄鱼
angulata
养殖区邻近甚至重叠，仍可能通过水体流动、直接
双齿围沙蚕
Perinereis 1 0 — — 接触或养殖操作等方式，构成潜在的传播风险。有
aibuhitensis
三疣梭子蟹 研究显示，锥虫具有跨宿主感染能力 [23] ，基于 18S
Portunus 6 0 — —
trituberculatus rDNA 序列分析，证实了蛭体内不同发育阶段的虫
紫贻贝 — — 体与鱼类血液中锥鞭毛体具有同源性，表明该虫生
Mytilus edulis 2 0 [24]
活史依赖于特定的蛭−鱼宿主关系 。不过国内关
本研究组织分布检测结果揭示了大黄鱼锥体虫 于大黄鱼、罗非鱼等锥体虫病的报道中，受检鱼体
在血液、心脏和脾脏中呈现显著富集状态。这一分 均未发现附着蛭类 [25-27] 。因此鲻鱼、真鲷及其同区
布规律与其生物学特性相吻合：锥体虫作为典型的 域其他非鱼类生物是否会成为其潜伏宿主，仍需通
血液寄生虫，其生活史生活于血液的阶段，依赖血 过长期监测其锥体虫携带动态（区分附着与感染状
[5]
液流动实现全身扩散 。心脏作为血液循环的核心 态）及传播效率实验而进一步明确。
枢纽，是虫体必然流经部位，而脾脏作为鱼类重要 大黄鱼黏液作为锥体虫潜在传播途径的初步推
的免疫器官，丰富的血液供应和免疫细胞聚集环境 测，以及鲻鱼和真鲷以及非鱼类样品（裙带菜、牡