Page 115 - 《渔业研究》2025年第5期

656 渔 业 研 究 第 47 卷

养殖区 18 尾样品中，15 尾呈阳性，感染率为 83.33%； 力等症状，部分严重感染个体可见体表溃烂、尾鳍
连江养殖区 24 尾样品中，23 尾呈阳性，感染率为 破损、鳃丝多呈苍白色、脾脏颜色变化明显、肝脏
95.83%。受感染的大黄鱼表现出典型的病理特征 肿大等，鳃丝苍白等症状与锥体虫破坏红细胞、引
[6]
（图 7） ：体色变淡、鳃盖张开频率增加、游动无 发贫血致病的机制一致 。

a) b)

c) d)

图 7 患病大黄鱼病理特征
Fig. 7 Pathological characteristics of diseased L. crocea
注：a. 体表；b. 鳃；c. 肝脏；d. 脾脏。
Notes: a. Body surface; b. Gill; c. Liver; d. Spleen.

2.8 其他养殖鱼类及非鱼类样品的锥体虫检测 了高度的序列保守性，且在基因组中拷贝数较高，
为明确锥体虫在养殖生态系统中的宿主适应 这一特性使其成为真核病原体分子检测的理想靶基
性及环境存续状态，采用上述建立的 qPCR 方法对 因，能够有效避免因基因变异导致的检测漏检问
同期采集的鲻鱼、真鲷及养殖区非鱼类样品（如各 题 [15] 。而 β-肌动蛋白、3-磷酸甘油醛脱氢酶（Gly-
种浮游生物、小型甲壳类动物、养殖水体等）进行 ceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase, GAPDH）等
检测。结果表明（表 2） ，鲻鱼和真鲷中仅少数组 单拷贝看家基因由于拷贝数低，易导致检测灵敏度
织样本检出锥体虫，且病原载量极低（Ct 均值为 不足；COⅠ等线粒体基因组基因虽同样具有多拷
34） ，表明二者并非锥体虫的适宜宿主，感染程度 贝的特点，但远低于 18S rDNA，且进化速率更
有限。然而，检测到的微量虫体提示它们可能作为 快、种间变异大，难以满足稳定检测的需求；因此
传播载体，在养殖环境中构成潜在的间接传播风 均未作为本研究的检测靶标。通过特异性试验验
险。此外，同一养殖区域中非鱼类样品锥体虫检测 证，该方法仅对大黄鱼锥体虫出现特异性扩增信
结果表明（表 3） ，裙带菜（93.33%）的检出率最 号，而对鱼类车轮虫、刺激隐核虫、副溶血弧菌、
高，Ct 值为 30.5；网衣与福建牡蛎也检测出少量 溶藻弧菌等常见寄生虫性和细菌性病原，以及神经
锥体虫，其中网衣平均 Ct 值为 37.0，检出率为 坏死病毒、大黄鱼虹彩病毒等病毒性病原均无交叉
16.67%，福建牡蛎 Ct 值为 34.0，检出率为 17.00%； 反应，这一结果充分证明了引物与探针设计的高度
而悬浮物、龙须菜、养殖水、沙蚕、螃蟹、贻贝均 特异性，其特异性显著优于常规 PCR 技术 [16] ；在
未检出目标物。 灵敏度方面，该方法的检测下限达到 25 拷贝/µL，
接近于徐锐龙等 [17] 建立的大口黑鲈（Trypanosoma
3 讨论
micropterus）锥体虫 TaqMan 探针荧光定量 PCR 方
本研究建立的 TaqMan 探针 qPCR 检测方法以锥 法最低检测限（13 拷贝/µL） ；这一水平显著高于传
体虫 18S rDNA 基因为靶标，该基因作为真核生物 统的显微镜检查法（需样本中虫体数量达到一定密
核糖体小亚基的编码序列，在长期进化过程中保持 度才能观察识别，往往错过早期感染阶段） ，也优于