Page 114 - 《渔业研究》2025年第5期

第 5 期 葛 辉等： 大黄鱼源锥体虫荧光定量 PCR 检测方法的建立及应用 655

2.5 重复性实验 3 000
2 500
5
2
组内重复性试验中，2.5×10 ~2.5×10 拷贝/µL 2 000
浓度范围内的模板 Ct 值变异系数为 0.47%~0.92%， 荧光值 1 500 1 2 3 4 5
均小于 1.5%；组间重复性试验中，各浓度模板 Ct Fluorescence 1 000
500
值变异系数为 0.98%~1.62%，均小于 2.0%（表 1） ，
0
表明该方法具有良好的重复性和稳定性，可用于批 −500
1 5 10 15 20 25 30 35 40 45
量样品的检测分析。 循环数
2.6 组织分布特征 Cycles
对患病大黄鱼 9 种组织的锥体虫含量检测结果 图 5 大黄鱼锥体虫荧光定量 PCR 灵敏度检测结果
显示，锥体虫在不同组织中的分布存在极显著差异 Fig. 5 Results of fluorescence quantitative PCR
（P<0.01） 。其中，心脏中锥体虫含量最高达 1.20× sensitivity assay for Trypanosoma spp. in L. crocea
10 拷贝/µL；其次为脾脏和血液含量，分别为 1.02× 注：1~5 分别为 2.5×10 、2.5×10 、2.5×10 、2.5×10 、
6
5
3
2
4
10 、5.98×10 拷贝/µL；头肾、体肾、鳃中的含量 2.5×10 拷贝/µL。
5
6
1
4
3
5
2
5
5
较低，分别为 3.12×10 、2.92×10 、2.99×10 拷贝/µL； Notes: 1−5 indicate 2.5×10 , 2.5×10 , 2.5×10 , 2.5×10 , and
4
1
肝脏、黏液、肠道中的含量无显著差异，均低于 2.5×10 copies/µL.

4
2.00×10 拷贝/µL（图 6） 。

表 1 大黄鱼锥体虫 qPCR 重复性检测
Tab. 1 Variability qPCR test of Trypanosoma spp. in L. crocea
组间变异系数/% 组内变异系数/%
Coefficient of variation between groups Coefficient of variation within group
模板量/（拷贝/µL） 模板量/（拷贝/µL）
Template quantity/(copies/µL) 平均值± 变异系数/% Template quantity/(copies/µL) 平均值±标准差 变异系数/%
标准差
（ ¯ x±SD） CV （ ¯ x±SD） CV
8.6×10 4 20.86±0.34 1.62 2.5×10 5 20.27±0.10 0.47
6.2×10 3 25.07±0.35 1.38 2.5×10 4 23.66±0.12 0.52
5.8×10 2 29.00±0.30 1.02 2.5×10 3 26.91±1.67 0.62
4.3×10 1 32.70±0.32 0.98 2.5×10 2 30.60±0.28 0.92

1 500 000 a
b
1 000 000
c
浓度平均值/（IU/mL） Average concentration 40 000 e e
500 000
d
d
30 000
20 000
e
10 000 e
0
肠 肝脏 脾脏 鳃 体肾 头肾 心脏 血液 黏液
Intestine Liver Spleen Gill Body Head Heart Blood Mucus
kidney kidney
图 6 大黄鱼各组织锥体虫浓度含量荧光定量 PCR 结果
Fig. 6 Fluorescence quantitative PCR results of Trypanosoma spp. concentration in various tissues of L. crocea
注：柱上不同字母表示各组织之间存在极显著差异（P<0.01） 。
Note: Different letters on the columns indicate highly significant differences between the tissues (P<0.01).

2.7 大黄鱼锥体虫感染检测 性样品共 56 尾，总体感染率为 93.33%。不同养殖
对采集自三都岛、霞浦、连江三个养殖海区 区的感染率存在一定的差异：三都岛养殖区 3 个渔
的 60 尾大黄鱼样品进行 qPCR 检测，结果显示阳 排的 18 尾样品全部为阳性，感染率达 100%；霞浦