Page 159 - 《水产学报》2026年第3期
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3 期                                     水    产    学    报                                 50 卷

              使用消毒后的河水作为水源。试验期间每天进行                            脂肪酶   (LPS)，血清中谷丙转氨酶          (ALT)、谷草转
              2  次表观饱食人工投喂         (06:00  和  18:30)，每日记录      氨酶  (AST)，肝脏中超氧化物歧化酶            (SOD)、谷胱
              摄食量、残饵量、死鱼数量和重量。每日监测水                            甘肽过氧化物酶       (GPx)、过氧化氢酶       (CAT)、丙二
              质参数，整个养殖期间水温为               18~26 ℃，盐度为          醛  (MDA) 等指标均使用南京建成生物工程研究所
              3~4，氨氮低于      0.2 mg/L，亚硝酸盐低于      0.05 mg/L，    有限公司的试剂盒测定，每组测定                 3  个生物学重
              pH 7.9~8.2，溶解氧含量高于         5.0 mg/L。本研究获         复，每个生物学重复含           3  个混合个体样本，严格
              得了上海海洋大学实验动物管理和使用伦理委员                            按照说明书步骤操作。
              会批准，实验过程中操作人员严格遵守上海海洋                                 基因表达测定       (RT-qPCR  法)  根据肝脏
              大学伦理规范，并按照上海海洋大学伦理委员会                            生化指标及组织学观察结果，CF35.0              组的肝损伤
              制定的规章制度执行。                                       最为严重，而在        CF70.0  组中损伤有所缓解，整体
                                                               呈现  CPC  替代量与肝损伤之间的倒置二次曲线效
               1.3    样品采集
                                                               应。因此，选取        CF0、CF35.0  和  CF70.0  组，分别
                   每次取样前，将鱼禁食           24 h。统计每个网箱            检测两个试验阶段的组织            mRNA  表达水平，以进
              中鳜的数量和总重量。从每个网箱随机选取                      8  尾
                                                               一步解析其潜在的分子调控机制。RNA                 样本每组
              鱼，使用      MS-222(50 mg/L) 麻醉，其中     2  尾鱼进       设置  3  个生物学重复，每个生物学重复含                3  个混
              行全鱼体成分分析；剩余            6  尾鱼测量体长和体重，             合个体样本。使用          Trizoi 试剂  (TaKaRa，日本)
              并通过尾静脉穿刺取血，随后解剖出脑、肝脏、                            提取脑、肝脏、中肠总            RNA，通过超微量分光
              生殖腺、胃、肠道、背肌，记录内脏、肝脏、腹                            光度计    (Eppendorf，德国) 测定    RNA  浓度和质量
              腔脂肪及生殖腺重量。取            3  尾鱼肝脏和后肠组织，             (A260/A280 > 2.0)。使用  PrimeScript™ RT  试剂盒
              用  4%  多聚甲醛固定并在         4℃  下保存，其余样本             (TaKaRa，日本) 将    RNA  反转录为    cDNA。使用核
              经液氮速冻后存储在−80 ℃。血样静置                   1 h  后，    糖体蛋白     L13a (rpl13a) 作为内参基因，按照表          2
              在  4℃  下以  4 000 r/min  离心  10 min，收集上清液         中列出的引物，在实时定量               PCR  仪  (Eppendorf，
              得血清进行后续分析。形体指标计算公式：                              德国) 上进行扩增，反应体系及条件参考此前的研
                   腹腔脂肪指数       (PFI，%) = [(腹腔内脂肪重量            究 。使用     2 −∆∆C t  方法计算相对基因表达量 。
                                                                 [18]
                                                                                                     [19]
              (g)/全鱼重量    (g)] × 100%；                              组织学分析  各组随机选取试验鱼                  6  尾，
                   脏体比   (VSI，%) = [(内脏重   (g)/全鱼重量   (g)] ×   分别采集肝脏及后肠组织，经               4%  多聚甲醛溶液
              100%；                                            固定  24 h  后依次通过梯度乙醇脱水、石蜡包埋后，
                   肝体比   (HSI，%) = [(肝脏重   (g)/全鱼重量   (g)] ×   切成  7 μm  厚石蜡切片，经苏木精-伊红            (H.E) 染色
              100%；                                            后进行组织学观察 。另外，将肝脏样本从−80 ℃
                                                                               [20]
                   性腺指数   (GSI，%) = [(性腺重  (g)/全鱼重量   (g)] ×   取出后，迅速使用冷冻切片机制备                 12 μm  厚度冰
              100%。                                            冻切片 。载玻片经          70%  乙醇漂洗    2  次后，采用
                                                                     [21]
               1.4    测量指标及方法                                  油红  O  染液染色    5 min。染色完成后，在光学显
                                                               微镜下观察样本并随机选取             3  个视野进行图像采
                    基 本 营 养 组 成     营 养 试 验 测 定 均 参 照
                                                               集。使用    ImageJ 1.45  软件  (美国国立卫生研究院)
                         [16]
              AOAC  标准 。饲料、全鱼的粗蛋白含量采用凯
                                                               对油红   O  染色图像进行定量检测并分析脂滴相对
              氏定氮法测定；粗脂肪用三氯甲烷-甲醇法测定；
                                                               面积。每种染色方法及组织类型均保证每组至少
              粗灰分含量采用        550 ℃  灼烧法测定；水分含量采
                                                               分析  3  个生物学重复。
              用  105℃  恒重法测定。饲料氨基酸含量采用酸水
                                                                1.5    数据分析
              解法 。饲料总脂使用氯仿甲醇法提取，经甲酯
                   [17]
              化后，使用气相色谱仪            (7890A，安捷伦科技，美                 采用   SPSS 25.0 统计软件    (SPSS Inc.,美国) 对
              国) 联合质谱仪      (5975A，安捷伦科技，美国) 分析                试验数据进行分析，所有统计结果均用平均值±标
                         [17]
              脂肪酸组成 。                                          准误   (mean±SE) 表示。使用      Shapiro-Wilk  检验验
                    酶活性及生化指标测定  胃中胃蛋白酶                         证数据正态性，采用          Levene 检验数据方差齐性。
              (PEP)，前肠中胰蛋白酶          (TRY)、淀粉酶     (AMY)、      对于符合正态分布且方差齐性的数据，采用单因

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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