Page 41 - 《水产学报》2026年第01期
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1 期                   严孟芝，等：大口黑鲈         IL-12  表达分析及异构体组成形式鉴定                           50 卷

              显著，则采用       Tukey  氏多重比较来检验不同处理组                失。p40c 亚基则表现为         IG-Like 和  IL-12p40_C  双
              间的差异显著性，P<0.05         为差异具有统计学意义。               结 构 域 中 第   4  号  β  折 叠 的 共 缺 失 现 象 。 使 用
                                                               MEME  分别预测不同物种          p35  和  p40  结构域中具
               2    结果                                         体的保守基序       (图  1)，发现   IL-12p35  蛋白中存在

                                                               2  个保守的基序：110-CSALRKSSFDEAKCLKNI-
               2.1    大口黑鲈   IL-12  亚基基因序列特征及蛋白
                                                               YEDLKYYKLELQSYKP-143     和  175-ETVPQKVPV
              结构分析                                             EEPSSFDDRLKLCKVLKAFHIRAITINRVLAY-215，
                   通过本地     Blast 分析得到大口黑鲈        IL-12α  亚    其余保守氨基酸位点均集中在                α  螺旋处。对于
              基基因    p35a  和  3  个  IL-12β  亚基基因  p40a、p40b    p40  蛋白，其内部均存在多个保守基序，其中纤
              与  p40c，其基因和编码蛋白特征见表              2。ClustalW     维连接蛋白Ⅲ型结构域           (FN3) 中与受体激活相关
              多序列比对结果显示，大口黑鲈                 p35  与  p40  中存   的  WSXWS  盒子   319-WSEWS-323  基序高度保守。
              在多个高度保守的半胱氨酸               (Cys，简称    C) 位点      基 于 以 上 多 序 列 比 对 、 SMART     结 构 域 预 测 及
                                               40
                                                        90
                                                    83
              (图  1)。大口黑鲈    p35a 氨基酸序列中      C 、C 、C 、        MEME  预测得出，大口黑鲈            p35a 和  p40a、p40b
                103
              C 、C   172  与其他物种   p35  的半胱氨酸位点是保守              和  p40c 亚基蛋白整体结构分别与人            p35  及  p40  亚
              的。与不同进化水平的物种进行多序列比对，结                            基结构高度相似，进一步推测这些亚基能够在大
                                            91
                                                 130
                                       51
              果 显 示 大 口 黑 鲈    p40a 的  C 、 C 、 C 、 C  141  和   口黑鲈体内发生相互作用，形成不同的                    IL-12 二
                                131
                       46
                                                        91
                                                    43
                           91
              p40b  的  C 、C 、C 、C    142  以及  p40c 的  C 、C 、   聚体。
                118
              C 、C   129  位点均是保守的。这些保守的半胱氨酸                     2.2    大口黑鲈  IL-12  基因的组织表达水平检测
              位点是    IL-12  亚基单体蛋白折叠形成自身二硫键
                                                                   为探究大口黑鲈        IL-12  在各组织的表达水平，
              的关键位点。
                                                               通过  qPCR  技术检测了      p35a、p40a、p40b  和  p40c
                   为了解大口黑鲈        IL-12  结构的保守性，通过
                                                               在健康大口黑鲈        6  个不同组织中的表达。从检测
              SMART   网 站 预 测  p35a 和  p40a、 p40b  和  p40c 蛋
                                                               结果可以看出，本研究的             4  个  IL-12  亚基基因在
              白质单体的结构域，结果如图               2  所示，大口黑鲈
                                                               肝脏、脾脏、头肾、体肾、肌肉、后肠组织中均
              IL-12p35a 主要由   4  个  α  螺旋构成   4  束螺旋结构
                                                               都有不同程度的表达，其中             p35a  在体肾中表达量
              (图  2-a)，3  个  p40  亚基均由  3  个主要的结构域组
                                                               最高，头肾中最低；p40a         在后肠中的表达量最高，
              成  (图  2-b~d)，其中  p40a 和  p40c 蛋白  N  端到  C  端
                                                               肝脏中最低；p40b       在体肾中表达量最高，头肾中
              依次由免疫球蛋白样结构域              (IG-Like)、IL-12p40_
                                                               最低；p40c 在后肠中表达量最高，头肾中最低
              C  结 构 域 和   d1f4a3  构 成 。 p40b  蛋 白  N-C  端 由
                                                               (图  3)。β-actin  作为内参基因，以      IL-12  亚基在头
              d1f4a1、IL-12p40_C  结构域和纤维连接蛋白Ⅲ型
                                                               肾中的表达水平为基准进行多重比较。
              结 构 域   (FN3) 构 成 。 与 人 类   IL-12  结 构  (PDB：
                                                                2.3    鰤鱼诺卡氏菌感染不同阶段大口黑鲈                 IL-
              1F45) 相比，p35a 亚基的       4 个  α  螺旋高度保守，
              而  p40a 亚基中，IG-Like 结构域的第         2 (B)、4 (d，    12  诱导表达分析
              D)、5 (E) 号  β  折叠与   IL-12p40_C  结构域的第     4         鰤鱼诺卡氏菌是导致鱼类诺卡氏菌病的主要
              号  β  折叠同时发生缺失。p40b         亚基的结构变异相             病原之一，为探究         IL-12  在大口黑鲈抗鰤鱼诺卡
              对较少，仅在       d1f4a1  结构域出现第      4  号  β  折叠缺    氏菌的免疫反应中的表达变化，使用浓度为                    1×10 3

                                           表 2    大口黑鲈  IL-12  基因及其编码蛋白特征
                                          Tab. 2    Characteristics of IL-12 in M. salmoides
                  基因           NCBI序列号           ORF长度/bp        氨基酸数量/个          分子质量/ku         等电点
                  gene       NCBI accession no.     ORF           amino acids        Mw             pI
                  p35a        XP_038574041.1        600              199             22.4           6.3
                  p40a        XP_038563988.1        969              322             36.4           6.5
                  p40b        XP_038554509.1       1 071             356             41.1           8.8
                  p40c        XP_038560704.1       1 038             345             39.6           8.6

              中国水产学会主办  sponsored by China Society of Fisheries                          https://www.china-fishery.cn
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