Page 173 - 《水产学报》2026年第01期
P. 173

1 期                                     水    产    学    报                                 50 卷

              生长性能和饲料利用率 ，死亡率增加、氧化应                            饲料原料，经水产专用挤条膨化机压成细条，再
                                    [2]
                [3]
                                   [4]
              激 以及诱发炎症反应 等。有机硒比无机硒具                            用烘干机烘干。用饲料专用粉碎机粉碎直径为
              有优势，包括生物利用度高、副作用少、环境污染                           1 mm  的颗粒饲料，放入自封袋封紧后在−20 ℃                下
                [5]
              少 。有机硒也是一种极好的抗氧化剂，有助于                            保存备用。通过电感耦合等离子体质谱法                     (ICP-
              提高养殖动物的抗氧化性能 。                                   MS) 分析饲料中的硒含量，实验饲料                  (S0、S1、
                                       [6]
                   硒代蛋氨酸是饲料中硒添加的常用形式。在                         S2、S3、S4、S5) 最终的硒含量分别为            0.17、0.22、
              鱼类中，硒代蛋氨酸比无机形式更具生物活性，                            0.29、0.33、0.41  和  0.45 mg/kg。
              被认为是无机硒的有效替代品，在相同的添加水
                                                                1.3    实验鱼的饲养
              平下具有更显着的沉积效率             [7-8] 。低剂量的硒代蛋
              氨酸具有有益的效果，而高剂量则会产生抑制或                                本研究所有实验程序均遵循华中农业大学关
              毒性作用     [9-11] 。硒代蛋氨酸缺乏会对动物的神经、                 于实验动物使用的伦理规范，并经华中农业大学
              心血管、免疫系统和肌肉生长产生有害影响                       [12] 。  伦理委员会批准。
              对于水产养殖鱼类，硒需求量范围为                  0.1~0.5 g/kg       黄颡鱼购自武汉某养殖场，在正式实验前于
              (干重)。本研究以硒代蛋氨酸为硒源，设置硒代                           华中农业大学水产基地           (300 L  养殖缸) 暂养   2  周。
              蛋氨酸浓度梯度的饲料，旨在探究硒代蛋氨酸不                            随后，将     450  尾大小均一、健康无病的黄颡鱼
              同水平梯度对黄颡鱼生长性能、肌肉组织学、抗                            [(4.00±0.01) g] 随机分配到   18  个鱼缸中，每组设
              氧化水平以及硒蛋白基因表达的影响。                                置  3  个重复，每缸    25  尾鱼。实验在半静态水族系
                                                               统中进行，连续充气以保持水体溶解氧接近饱和。
               1    材料与方法                                      实验期间，每天投喂          2  次  (9:00  和  16:00)，饱食投
                                                               喂。实验过程中，摄食前和摄食后                10 min  采集水
               1.1    实验试剂                                     样，水中的硒浓度很低，可以忽略不计，每天记
                   qRT-PCR  荧光定量试剂盒、逆转录试剂盒购                    录摄食量和死亡情况，及时清理残饵，每                    2  周对
              自宝日医生物技术         (北京) 有限公司。qRT-PCR        引      实验鱼进行称重。实验是在室温和自然光周期下
              物由武汉擎科生物有限公司合成。总蛋白质测定                            (约  12 h  光照/12 h  黑暗) 进行的。每周监测水质参
              试剂盒    (考马斯亮蓝法)，过氧化氢酶              (CAT)、总       数  2  次。整个实验期间，水温控制在            28.0~30.0 ℃，
              超 氧 化 物 歧 化 酶    (T-SOD)、 总 抗 氧 化 能 力     (T-    pH  为  7.2~8.0，其间不断充气增氧，保持溶解氧
              AOC)、丙二醛      (MDA) 和  GPX  测定试剂盒均购自             含量不低于      6 mg/L，氨氮浓度不高于0.05 mg/L，
              南京建成生物工程研究所。亚硒酸钠、NADPH、                          亚硝酸盐浓度不高于          0.005 mg/L，各项水质指标
                    +
              NADP 、葡萄糖-6-磷酸         (G6PD)、DL-异柠檬酸、           符合黄颡鱼养殖要求。饲养试验结束时，禁食                      24
                                      ®
              L-苹果酸购自     Sigma-Aldrich 公司。CuSO 、K SO 、        h  后计数、称重和取样。实验进行             10  周。
                                                 4
                                                         4
                                                     2
              H SO 、H BO 、HCl、NaOH、KOH、HNO 、冰                   1.4    样品采集
                   4
                       3
                2
                                                     3
                           3
              醋酸、无水乙醚均为分析纯             (上海国药集团化学试
                                                                   在第   10  周取样时，饥饿       24 h  后，将所有鱼
              剂有限公司)。实验所用黄颡鱼来自华中农业大学
                                                               用  100 mg/L  的  MS-222  麻醉，计数和称重以确定
              水产养殖基地。
                                                               存活率   (SR)、增重率     (WG) 和特定生长率       (SGR)。
               1.2    实验饲料                                     在得到每缸鱼的最终总重量后，每缸随机抽取                       9
                   本实验饲料以酪蛋白、鱼粉、玉米粉和玉                          尾鱼，称重并在冰上解剖，得到肝脏和内脏样本，
              米蛋白粉为蛋白源，新鲜鱼油、氧化鱼油和豆                             用于计算脏体比        (VSI) 和肝体比    (HSI)。每缸随机
              油为脂肪源，小麦粉为糖源，以纤维素为填充                             抽取  6  尾鱼，于冰上迅速取其肌肉组织置于                 TRI-
              剂，以硒代蛋氨酸形式添加配制                  6 组实验饲料          zol 溶液中用于     RNA  的提取。每缸另取          3 尾鱼，
              (表  1)， 添 加 量 分 别 为   0  mg/kg(S0)、 0.15  mg/kg  采集肌肉，4%      多聚甲醛固定，用于组织学观察。
              (S1)、0.30 mg/kg(S2)、0.45 mg/kg(S3)、0.60 mg/kg    每缸随机选取另外         6  尾鱼，取其肌肉样本得到合
              (S4) 和  0.75 mg/kg(S5)。饲料原料粉碎后过         60  目    样，快速冷冻于液氮中，保存于–80 ℃，分别进
              筛，遵循逐级放大原则进行充分混匀。充分混匀                            行  RT-qPCR、营养成分、酶活性、硒含量和蛋白

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
                                                            2
   168   169   170   171   172   173   174   175   176   177   178