Page 182 - 《水产学报》2025年第10期

刘海静，等 水产学报, 2025, 49(10): 109613

形态和结构。 表 2 实时荧光定量 PCR 引物

1.8 性腺质地特征分析 Tab. 2 Real-time PCR (RT-PCR) primers used in
the study
将海胆性腺小心完整取出后，置于干净、
基因名称 序列
无菌的一次性培养皿中，并将培养皿置于冰上， gene name primer
COLP1α F: TCAGTTCAGTGTCAGCGGATGTC
然后立即使用质构仪 (TMS-Pro，FTC，美国) R: ATGTTGCCTTCCAAGATGCCAATG
测定海胆性腺质地 。使用直径 20 mm 的圆柱 COLP2α F: GCACAGGTTCTTCTAAGCACAAGTC
[2]
R: GTCATCACGCACGATACAAGCATAC
形探头，以 30 mm/min 的速率将每个样品压缩 COLP3α F: CAGGCAGCAACAGGAAACGATAC
2 次至其原始高度的 50%。硬度 (N) 是指首次压 R: ATGATGGTGGCGGTGATGATGG
SNIP1 F: GATAGGAGAGGCAATAGGCAGGAAC
缩样品时的最大峰值；内聚性 (Ratio) 是指样品 R: ACCTTCGTCTTCATCGTTTGTTTGG
内部的粘附力；胶黏性 (N) 是指半固体样品的 TGFβR1 F: AAGGTGATGAAGGAGTGCTGGTATC
R: TGCGAGGCGTCACAGGTATTC
黏度特性 (硬度×内聚性)；黏附性 (N·mm) 是指 TGFβR2 F: GGTCATCGTCGTCTGTTCCGTAG
R: ATGCTCGTGCTCTCCGTGTTG
将圆柱形探头与样品分离所需要的功；弹性
MMP14 F: CAGTGAGACGATGGCGATGATGAAC
(mm) 是指样品在第 1 次压缩后恢复的程度；咀 R: GGTCCTGTTGATGATCCTATAAGTGAG
P4Hβ F: ATGGAGGAGGATGAGGAGATTGAC
嚼性 (mJ) 是指为咀嚼固体样品所需的功 (弹性× R: AGACTTGGGATGGACGCAGAC
胶粘性)。 LOXL2 F: TCTTGTTGTCCTTCTTCCAGTTCTTC
R: CAGTTCTCCTCAGCAGCACATTG

1.9 实时定量 PCR 18S F: GTTCGAAGGCGATCAGATAC
R: CTGTCAATCCTCACTGTGTC
使用特异性引物检测光棘球海胆性腺中
海胆组，其性腺重量和 GSI 显著高于 0 和 30
COLP1α、COLP2α、COLP3α、TGFβR1、TGFβR2、
mg/kg 维生素 B 组 2 (P<0.05)。

SNIP1、P4Hβ、MMP14 和 LOXL2 的表达 (表 2)。
2.2 添加维生素 B 对光棘球海胆性腺组织结
2
采用天根生化科技 (北京) 有限公司的 RNA 提
取试剂盒，从光棘球海胆性腺中提取 RNA，并 构的影响
通过琼脂糖凝胶电泳验证 RNA 样品的完整性。 在雄性海胆性腺中，精母细胞沿着卵泡壁
以提取的样品组织总 RNA 为模板，合成 cDNA 存在，在营养吞噬细胞 (NPs) 中可以观察到多
并储存在−20 °C 下。RT-PCR 采用 SYBR Green 个液滴。在雌性海胆性腺中，早期卵黄发生的
I 化学方法，反应体系为 20 μL，反应程序为两 卵母细胞沿着卵泡壁的内侧附着，形成不规则
步法。生物重复 3 次，每次都设置相应的空白 的球形。由图版可知，各实验组雌雄海胆的性
[2]
对照组，采用 2 −ΔΔCt 法计算相对表达水平 。 腺仍处于配子发生的生长发育和早期阶段。同

一饵料组雌雄海胆性腺的 NPs 数量和卵泡结构
1.10 数据分析
特征均无显著性差异。在饲料组中，随着维生
实验数据以平均值±标准误 (mean±SE) 表
素 B 的添加量逐步增加，海胆性腺 NPs 数量呈
2
示。使用 SPSS 26.0 统计软件进行单因素方差
先增加后减少的趋势。饲喂添加 15 mg/kg 维生
分析 (One-Way ANOVA)，并进行 Duncan 氏多
素 B 组的海胆性腺 NPs 数量明显高于 0 和 30
2
重比较，以评估不同饵料组间平均值的显著性
mg/kg 维生素 B 组。与饲料组相比，海带组雌
2
差异，以 P<0.05 表示差异显著。
雄海胆性腺的 NPs 数量明显减少。饲料组的雄

2 结果 雌海胆性腺卵泡均明显大于海带组，且更紧凑。
饲喂添加 15 mg/kg 维生素 B 组的雌雄海胆性
2

腺的卵泡明显大于 0 和 30 mg/kg 维生素 B 组，
2
2.1 添加维生素 B 对光棘球海胆性腺生长的影响
2
且更紧凑 (图版)。
海带组海胆的性腺重量和 GSI 显著低于饲
2.3 添加维生素 B 对光棘球海胆性腺水分和
2
料组 (P<0.05) (图 1)。在饲料组中，海胆的性腺
重量和 GSI 随维生素 B 添加量的增加，呈先上 干物质含量的影响
2
升后下降的趋势。饲喂 15 mg/kg 维生素 B 的 海带组海胆的性腺持水量显著低于饲料组，
2
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