Page 139 - 《水产学报》2025年第10期

陈强，等 水产学报, 2025, 49(10): 109610

洗涤 2 次，最终溶解于无核酸酶水中。使用 为内参基因。待测目的基因的引物根据公共数
PrimeScript RT 试剂盒 (TaKaRa，日本) 将 RNA 据库的序列进行设计并由生工生物工程有限公
逆转录为 cDNA 第一链。实时荧光定量 PCR 采 司 (上海，中国) 合成，引物序列如表 3 所示。
用 SYBR qPCR Master Mix(诺唯赞) 进行。因 β- 目标基因 mRNA 相对表达量通过比较循环阈值

[22]
actin 在不同处理组间表达最为稳定，故将其作 (CT) 法 2 ( −∆∆C t 法) 计算 。

表 3 实时荧光定量 PCR 引物序列
Tab. 3 Primer sequences for real-time fluorescent quantitative PCR
基因 genes 上游引物 forward primers (5′→3′) 下游引物 reverse primers (5′→3′)
β-actin ATCGCCGCACTGGTTGTTGAC CCTGTTGGCTTTGGGGTTC
acc1 ATCCCTCTTTGCCACTGTTG GAGGTGATGTTGCTCGCATA
acc2 GACAGAGAGTGATTCAGGTGGA GCTGGTTGTTGGAAGTGTAGAC
acly CACCAAGCGAACAGCAGACCTA CTCCCATCACTCTGAGACCTTCC
fas AGGCTGAGTGGGAGAAGGTG GACGGCGACAAAGAAAGAGG
chrebp TCATCCACAGCGGTCACTTCAT CAGTCAAACAGGCGGTTCAGAG
atgl GCTCCCCTACACTCTCCCTCT CTGCTCTCGAATCCACTCAAC
lpl TTCCTCGACCCTCTGAAAGA GGAGTCAAGTTTGCCAGGAA
aco GGAGGTTATTGTTTCGGTTCT GCCTTCTTTTGGTCTTTTCTG
acaa2 ACGCAACAAAGGTGGAAGGC GGTGGTCTGTGGACGAGGGT
cpt1 GAATGGGGTAATGACTGGTGTG TCGACTGATTGGTATGTGTTGG
acads GGTGCTGAACGGAACCAAAG TCCAGGATGATGTTCGCAGT
fabp CTGGAGACTATTACTGGAGAG ACACAATGCCACCAAGAG
mtp GACCTCCTCCCAAACTGCTCC CATTGTTGCCGATCTTTCCTT
cd36 TCAGGAGACACAAGAGGGAAGA TTGCCTGAACACCTTTACCGT
cct-α GGGAACACCACCCGATAGAC TCGCACCACTTCATCCACAT
cct-β CGCTATGTTGACGAGGTGGT TTCCTGCTTCCTTGATGTGC
lpcat3 CTTGCTGGAGAATCTGTCGG TAACTGTGGCAGGCTGGTAG
pemt CTGCGGAGGACTCAACAAC CATCGCCACGGTCATACTG
注：β-actin. β-肌动蛋白；acc1. 乙酰辅酶A羧化酶1；acc2. 乙酰辅酶A羧化酶2；acly. ATP柠檬酸合酶；fas. 脂肪酸合酶；chrebp. 碳水化合物反
应元件结合蛋白；atgl. 三酰甘油脂肪酶；lpl. 脂肪酶；aco. 乙酰辅酶 A 硫酯酶；acaa2. 线粒体3-酮基-CoA硫解酶；cpt1. 肉碱O-棕榈酰基转移
酶1；acads. 短链特异性酰基辅酶A脱氢酶；fabp. 脂肪酸结合蛋白；mtp. 微粒体甘油三酯转运蛋白；cd36. 清道夫受体 B 类成员 1；cct-α. 磷酸
胆碱胞苷转移酶α；cct-β. 磷酸胆碱胞苷转移酶β；lpcat3. 溶血磷脂酰基转移酶5；pemt. 磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶。
Notes：β-actin. Beta-actin；acc1. Acetyl-CoA carboxylase 1; acc2. Acetyl-CoA carboxylase 2; acly. ATP-citrate synthase; fas. Fatty acid synthase;
chrebp. Carbohydrate-responsive element-binding protein; atgl. Triacylglycerol lipase; lpl. Lipase; aco. Acetyl-coenzyme A thioesterase; acaa2. 3-
ketoacyl-CoA thiolase, mitochondrial; cpt1. Carnitine O-palmitoyltransferase 1; acads. Short-chain specific acyl-CoA dehydrogenase; fabp. Fatty acid-
binding protein; mtp. Microsomal triglyceride transfer protein; cd36. Scavenger receptor class B member 1; cct-α. choline-phosphate cytidylyltransferase
α; cct-β. holine-phosphate cytidylyltransferase β; lpcat3. Lysophospholipid acyltransferase 5; pemt. Phosphatidylethanolamine N-methyltransferase.

1.7 肌肉脂质组学分析 仪，以电喷雾电离 (ESI) 模式进行所有分析，条
每组取 4 管肌肉组织进行脂质组学分析， 件如下：curtain gas = 20, ion spray voltage = 5 500 V,
分析过程由中科脂典生物技术有限责任公司 (常 temperature = 400 °C, ion source gas 1 = 35, ion
州，中国) 完成，操作步骤简述如下，使用改进 source gas 2 = 35。
的 Bligh / Dyer 提取方法 (2 次提取) 从肌肉样品 使 用 Phenomenex Luna silica 3 μm(内 径
中提取脂质 。样品复溶在同位素混标 (具体组 150×2.0 mm) 色谱柱，在下列条件分离各种脂质：
[23]
成 成 分 见 下 一 段 内 标 组 成 ) 里 ， 使 用 Jasper 流动相 A(氯仿∶甲醇∶氨水 = 89.5∶10∶0.5)，
HPLC-TRIPLE QUAD 4 500 MD(Sciex) 液质联用 B(氯仿∶甲醇∶氨水∶水 = 55∶39∶0.5∶5.5)。

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