Page 138 - 《水产学报》2025年第10期

陈强，等 水产学报, 2025, 49(10): 109610

两周以使实验用鱼适应环境；暂养结束后，对 血清样品经适当比例稀释后可直接用于甘
鱼进行 24 h 禁食处理，随后从中随机挑选出 油三酯 (TG)、总胆固醇 (T-CHO)、低密度脂
180 尾体格均匀、健康个体，初始体重（4.31 ± 蛋白胆固醇 (LDL-C) 和高密度脂蛋白胆固醇
0.038） g，分配至 9 个 750 L养殖水桶中 (每桶 (HDL-C) 含量的测定。肝脏组织和肌肉组织需

20 尾鱼)；将 3 种实验饲料随机分配给 9 个水桶， 在生理盐水中匀浆 [v(微升)∶w(毫克)=9∶1]，
每种饲料设 3 个重复 (即每饲料组 3 桶鱼)。每 随后匀浆液在 4°C 下以 2 500×g 离心 10 min 后
日于 08:00 和 17:00 进行 2 次表观饱食投喂，并 收集上清液，用于生化指标测定 (肝脏：TG、T-
记录每次的投喂量。为期 8 周的养殖期内，维 CHO、LDL-C 和 HDL-C 含量、脂肪酶 LPS 活
持水温 24~26°C、溶解氧≥ 8.0 mg/L、pH 7.7~8.3、 性；肌肉：TG 和 T-CHO 含量)。本实验中用于
总氨氮< 0.5 mg/L、亚硝酸盐浓度< 0.1 mg/L， 生化检测的试剂盒购自南京建成生物工程研究
以确保大口黑鲈处于最佳生长环境。 所 (中国江苏)，其货号信息如下，甘油三酯
投喂实验结束后，对大口黑鲈实施 24 h 禁 (TG) 测定试剂盒 (货号：A110-1-1)，总胆固醇
食，随后统计每桶存活鱼数并逐尾称重以计算 (T-CHO) 测定试剂盒 (货号：A111-1-1)，低密度
生长性能指标；之后，每桶随机取 3 尾全鱼， 脂 蛋 白 胆 固 醇 (LDL-C) 测 定 试 剂 盒 (货 号 ：
于−20°C 冻存，用于后续全鱼常规营养成分分 A113-1-1)，高密度脂蛋白胆固醇 (HDL-C) 测定
析；同时，每桶另取 6 尾鱼进行解剖，分别称 试剂盒 (货号：A112-1-1),脂肪酶 (LPS) 测定试
量内脏团和肝脏重量以统计形体指标；取出的 剂盒 (货号：A054-1-1)，总蛋白 (TP) 测定试剂
血 清 、 肝 脏 和 肌 肉 组 织 经 液 氮 速 冻 后 置 于 盒 (货号：A045-2-2)。所有实验操作均根据试
−80°C 超低温冰箱中冻存，以备后续分析。生 剂盒配套说明书执行。
长指标计算公式如下：
1.4 脂肪酸测定
增重率 (WGR，%) = 100×[ 终末均重 − 初
始均重 ]/初始均重； 采用三氟化硼-甲醇法进行酯交换反应，并
特定生长率 (SGR，%/d) = 100 × [ln 终末均 利用配备氢火焰离子化检测器 (FID) 的 7890B
重 − ln 初始均重 ]/养殖天数； 气相色谱仪 (Agilent Technologies Inc., USA)，通
饲料转化率 (FCR) = 总摄食量/[ 终末总重 − 过外标法定量分析脂肪酸甲酯组成。色谱条件
初始总重 ]； 参照 Liu 等 [21] 的方法设定。各脂肪酸含量以占
存活率 (SR，%) = 100 × 终末尾数/初始 总脂肪酸的相对百分比表示。

尾数；
1.5 肝脏 H.E 组织切片观察
脏体比 (VSI，%) = 100 × 内脏团质量/鱼体
质量； 将新鲜的肝脏组织样本放入 4% 的多聚甲
肝体比 (HSI，%) = 100 × 肝脏质量/鱼体 醛中固定 24 h 后，用乙醇进行逐级脱水最后包
质量。 埋切片 (5 μm)，使用苏木精-伊红染色法 (H.E)

染色后使用中性树胶封片；使用显微镜 (Olym-
1.3 体成分分析和生理生化指标分析
pus BX53，日本) 对切片进行观察拍照。

全鱼样品的水分、粗蛋白、粗脂肪及灰分
1.6 RNA 提取、反转录和实时荧光定量 PCR
含量参照美国分析化学家协会 (AOAC) [20] 标准
方法测定：将样品置于冷冻干燥机 (LL1 500, 肝脏与肌肉组织总 RNA 采用 Trizol 试剂
Thermo Fisher Scientific) 中干燥至恒重，采用失 (南京诺唯赞生物科技股份有限公司，中国) 提
重法计算水分含量；使用凯氏定氮仪 (K355/ 取，操作步骤简述如下，取 10~150 mg 组织加
K437, BUCHI, Flawil, Switzerland) 测定粗蛋白含 入 1 mL Trizol 中匀浆，12 000×g 离心 10 min；
量；采用索氏抽提装置 (E-816, BUCHI, Flawil, 取上清加入 200 μL 氯仿，剧烈震荡 30 s 混匀，
Switzerland) 测定粗脂肪含量；样品经马弗炉 冰浴 3 min 后 12 000×g 离心 15 min；吸取上清
550 °C 煅烧 6 h，冷却至室温后称重计算灰分 液，加入 400 μL 异丙醇轻柔混匀，冰浴 10 min
含量。 后 12 000×g 离心 10 min；所得沉淀经 75% 乙醇

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