Page 71 - 《水产学报》2025年第6期
P. 71

张潭，等                                                                  水产学报, 2025, 49(6): 069106

              (100  尾/组)，其中包含       1  个对照组和      3  个实验       因素方差分析进行组间差异比较，以及                      New-
              组  (3  个重复)。利用热循环系统进行               1 h  控温，     man-Keuls 检验进行多重比较，P<0.05          表示具有
              实验组以      1 ℃/d  的速率从    18 ℃  升至26 ℃，并          显著差异，P<0.01      表示具有极显著差异。

              于  26 ℃  维持   7 d  后，以  1 ℃/d  的速率降温至
              18 ℃。实验期间对照组养殖水温保持在                    18 ℃，     2    结果

              水温温差维持在±0.2 ℃，24 h          连续充氧。
                                                               2.1    临床症状和解剖特征
                   采样点分别为升温阶段             (18、22  和26 ℃)、
              高温维持阶段        (26 ℃  下  4 h、48 h、7 d) 和降温            高温胁迫期间，升温至             21 ℃  时哲罗鲑停
              恢复期    (18 ℃)，所有采样均在相应温度点维持                      止摄食；26 ℃      维持期间，离体解剖发现部分样
              1 h  后进行。此外，同时采集             26 ℃  持续   105 h    本肝脏充血       (图版Ⅰ-1)、淤血       (图版Ⅰ-2) 及白
              时出现休克反应的           4  尾哲罗鲑样本。取样前，                化  (图版Ⅰ-3) 等症状；26 ℃        维持   105 h  时有  4
              录制哲罗鲑鳃盖开合视频             1 min，统计每分钟鳃             尾鱼出现休克症状，表现为失去平衡并侧翻，
              盖开合的次数        (n=5)，即为呼吸频率。取样时将                  逐渐停止游动，随循环水漂流，且腹部出现少量
              实验鱼置于浓度为           200 mg/L  的  MS-222同温度        出血，无菌解剖发现有肝脏充血                 (图版Ⅰ-4~6)。

              水中快速麻醉，每个采样点采集                  4  尾实验鱼的         2.2    呼吸频率变化
              鳃和肝脏组织于         Bouin  氏液中固定；使用注射
                                                                   高温胁迫期间哲罗鲑的呼吸频率变化结
              器抽取静脉血，于           4 ℃、4 000 r/min  条件下离
                                                               果显示，升温过程中，18、22                和  26 ℃  时的
              心  10 min  制备血清，−80 ℃     保存备用。
                                                               呼吸频率分别为          (59.67±4.18)、(66.50±2.66) 和

              1.3    组织学染色                                     (69.83±3.92) 次/min；26 ℃  维持  4 h、48 h、105 h
                                                               和  7 d  的呼吸频率依次为       (67.83±3.49) 、(87.33±
                   将组织从固定液中取出，用              70%  乙醇洗涤
                                                               5.50) 、(85.17±4.07) 和  (81.00±2.83) 次/min；自
              至无色。用常规石蜡包埋技术进行组织学分析，
                                                               26 ℃  降温至   18 ℃  时的呼吸频率为        (61.00±3.16)
              切片厚度为       6 µm。使用苏木精伊红染色试剂盒
                                                               次/min。在    18~26 ℃  升温期间，呼吸频率显著
              (BL700B，Biosharp，北京) 进行苏木精和伊红
                                                               升高   (P < 0.05)；而在   26 ℃  维持期间，呼吸频
              (H.E) 染色，并使用生物显微镜             (BX53，OLYM-
                                                               率在  48 h  时达到顶峰，随后开始下降，但仍显
              PUS，日本) 观察切片。每组随机选取                  10  张切
                                                               著高于对照组        (P<0.01)；在温度恢复至          18 ℃
              片 分 析 各 组 织 的 病 理 学 变 化 ， 并 根 据         Man-
                                                               时的呼吸频率与对照组相比无显著差异                        (P>
              souri 等 [26]  的半定量方法对组织结构变化程度进
                                                               0.05) (图  1)。
              行分级：无改变         (<10%)，轻度     (10%~30%)，中
              度  (31%~60%)，重度     (>61%)。                      2.3    鳃组织病理学变化及评分

              1.4    血清生化指标检测                                      18 ℃  对照组哲罗鲑鳃组织切片显示，其
                                                               鳃丝结构清晰，鳃小片伸展整齐，鳃组织细胞
                   使用全自动血液生化指标分析仪                  (BS200，
                                                               结构完整     (图版Ⅱ-1, 2)。高温胁迫条件下鳃组
              Mindray，中国) 及配套试剂盒           (深圳迈瑞生物医
                                                               织损伤在各实验组的样本中均有发生，共检查
              疗电子股份有限公司哈尔滨分公司) 测定血清样
                                                               出  9  种病理症状，其中产生于鳃丝部位的症状
              本 ， 测 定 的 生 化 指 标 包 括 天 冬 氨 酸 转 氨 酶
                                                               有血管闭塞、上皮破裂和增生；产生于鳃小片
              (AST)、 丙 氨 酸 转 氨 酶      (ALT)、 碱 性 磷 酸 酶
                                                               部位的症状有上皮细胞肥大并伴有破裂，以及
              (ALP)、乳酸脱氢酶        (LDH)、总胆固醇       (TC)、总
                                                               卷曲、黏合、缩短和上皮脱离               (图版Ⅱ-3~9)。
              蛋白   (TP) 和白蛋白     (ALB)，球蛋白      (GLB) 为总
              蛋白与白蛋白的差值。                                           升温至    22 ℃  时，鳃丝出现大量上皮细胞

                                                               破裂和细胞肥大，部分鳃小片卷曲，少量鳃丝
              1.5    数据分析
                                                               上皮破裂、血管闭塞和鳃小片上皮脱离                   (图版Ⅱ-
                   呼吸频率和血清生化指标数据以平均值±                          3)；升温至    26 ℃  时，上皮细胞破裂加重，且出
              标 准 差   (mean±SD) 表 示 ； 使 用    R  Studio  软 件    现较多鳃丝上皮破裂及增生，造成出血灶，少
              (2023.09.1-494) 进行统计和图表绘制；采用单                    部分鳃小片卷曲和缩短            (图版Ⅱ-4)；26 ℃     维持

              中国水产学会主办  sponsored by China Society of Fisheries                          https://www.china-fishery.cn
                                                            3
   66   67   68   69   70   71   72   73   74   75   76