Page 83 - 《中国药科大学学报》2026年第2期
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第  57 卷第  2 期         乔佳男，等：胰腺癌靶向纳米载体的合成、表征及其改善光动力治疗研究                                     209

               孔板上孵育       24 h。加入    LL/ZnPc 和  LL-PTP/ZnPc    基，用   PBS  缓冲液洗涤，加入新鲜的无血清培养基。
               溶液，并在培养箱中培养             12 h。在竞争抑制组中，            孵育后，将      MTT  溶液（2.5 mg/mL）40 μL 施加到
               加入   10 mmol/L PTP  溶液  1 h。然后将每组在       37 ℃    每个孔中，继续孵育         4 h。移除培养基，向每个孔中
               的培养箱中用       10 μmol/L  的  DCFH-DA  无血清培养        加入 DMSO 150 μL，以      300 r/min 振荡   5 min，以
               基培养    20 min，用无血清培养液洗涤，并用            15 J/cm 2  完全溶解蓝紫色结晶甲瓒。使用微孔板读数器在
               的  671 nm  激光照射。然后用        PBS  洗涤，胰蛋白酶          490 nm  处检测吸收度，并计算细胞存活率。
               消化，离心（800 r/min，5 min），并使用        MACSQuant
                                                                 3    结果与讨论
               流式细胞仪测量每组细胞的荧光强度。
                    通 过  MTT  法 研 究 了 游 离 药 物 和 纳 米 粒 对          3.1    炔基化  LND  的合成
               PANC-1 细 胞 的 细 胞 毒 性 作 用 ， 实 验 组 为 游 离                将  LND  中羧基制备成酰氯，通过形成酯键与
               LND、 ZnPc、 ZnPc+  Laser 和   LL、 LL/ZnPc、 LL/     炔丙醇共价偶联，合成路线如图                 1。通过对其 H
                                                                                                           1
                                                                           1
               ZnPc+Laser、 LL-PTP/ZnPc+Laser。 根 据    LL-PTP/    NMR  解析： H NMR（300 MHz，DMSO-d ）：8.13 (d,
                                                                                                    6
               ZnPc 中  LND  的含量计算     LL  和  LND  的浓度，并建        1H, Ar-H)，7.85(d, 1H, Ar-H)，7.68(d, 1H, Ar-H)，7.56
               立对照组（无药物）和空白组（无细胞和药物）。将                          (t, 1H, Ar-H)，7.43(t, 1H, Ar-H)，7.41(d, 1H, Ar-H)，
               PANC-1 细胞以每孔       5×10 个细胞的密度接种在          96    7.08(d, 1H, Ar-H)，5.86(s, 2H, CH )，5.03(d, 2H, CH )，
                                      3
                                                                                                           2
                                                                                            2
               孔板中，在     37 ℃  下孵育   24 h。移除含药物的培养              3.57(t, 1H, C≡CH)，确证结构。

                                   HO                        Cl                         O

                                       O                         O                         O
                                  N                         N                         N
                                  N                         N                         N
                            Cl                        Cl             HO         Cl
                                            SOCl 2
                                                                       CH 2 Cl 2
                                            CH 2 Cl 2
                                Cl                        Cl                        Cl
               Figure 1    Synthetic schemes of alkynylated lonidamine (LND)

                3.2    LL-PTP  偶联物的合成与表征                             LL-PTP  偶联物为白色絮状固体，具有较好的
                    为了获得更高的合成效率，本研究应用点击反                        水溶性。如图         3-C  所示，LL-PTP  偶联物在水中
               应合成    LL-PTP 偶联物。首先，叠氮修饰的               PTP-    自组装形成无色均匀的分散溶液，激光束下的丁达
               LMWH-N 通过      Cu(I) 催化的 1,3-偶极环加成点击             尔效应表明它们具有纳米尺度，DLS                进一步证实了
                        3
               反应与炔基化的 LND 制备成两亲性 LL-PTP 偶联                     这一点。如图         3-D  所示，LL-PTP  偶联物的粒径
               物（图   2）。比较   PTP-LMWH-N 的 3   FTIR  光谱，由于       为（217.45±2.53）nm，多分散指数（PDI）为           0.267±
               与炔基化      LND  发生点击反应形成三唑环，LL-                   0.019，Zeta 电位为（−22.22±0.63）mV。较小的粒径
                                                  −1
               PTP  偶联物中归因于叠氮基的            2 119 cm 吸收峰完        有助于在肿瘤组织中蓄积，负电位使偶联物具有良
               全消失（图      3-A）。这一发现证实了目标产物               LL-    好的物理稳定性。有趣的是，由于                 LL-PTP  偶联物
               PTP  偶联物已成功合成。此外，LL-PTP              偶联物的        的两亲性，当浓度达到临界聚集浓度（CAC）时，它
                        1
               结构通过 H NMR        进一步验证。如图           3-B  所示，    们可以在水中通过自组装形成外部具有亲水性
                                                                                                       [13]
               δ4.95~5.35 ppm  的峰值属于     LMWH   结构中的氢。          LMWH、内部具有疏水性            LND  的纳米结构 。使
               LND  的 特 征 峰 在   δ7.0~8.4  ppm、 δ5.5~6.0  ppm  处  用荧光光度法检测        LL-PTP  偶联物的    CAC  为  52.97
               检 测 到 ， PTP  的 特 征 峰 出 现 在     δ1.04~1.16  ppm、  μg/mL，低于常见的表面活性剂的               CAC，表明    LL-
               δ0.80~0.92 ppm  处，表明   LL-PTP  偶联物的形成。           PTP  偶联物形成的纳米结构可以为不溶性药物提
               此外，紫外分光光度法计算             LL-PTP  中  LND  的取代     供更多的疏水空间，并且            CAC  值低使其注射后在
                                                                                           [14]
               度（DS）为（53.7±1.2）%。LND      的高取代率归因于合             血液中具有更好的稀释稳定性 。
               成中采用的高效点击反应，这更有利于克服传统纳                            3.3    LL-PTP/ZnPc 的制备与表征
               米药物负载能力的局限性，并发挥良好的治疗效果。                               通过透析法将       ZnPc 包封在   LL-PTP  偶联物中，
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