Page 100 - 《中国药科大学学报》2026年第2期

226 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2026, 57(2): 224 − 232 第 57 卷

时还原糖含量来量化酶解效率；并采用凝胶色谱法 照，使用酶标仪在激发波长在 492 nm，发射波长在
测定 DOP 的相对分子质量，乌氏黏度计法结合 518 nm 条件下，测定各浓度溶液荧光强度。以
Mark-Houwink 方程测定 MDOP、LDOP 的相对分 FITC 质量浓度（μg/mL）为横坐标，荧光强度（扣除
子质量。 PBS 空白值）为纵坐标，绘制标准曲线。
2.2 脂质体的制备 取 F-DOP、F-MDOP、F-LDOP，用 PBS 溶解后
按比例称取大豆卵磷脂、胆固醇、十八胺体系 在量瓶中定容，充分混匀，在上述相同检测条件下
溶于乙醚，与 3 种相对分子质量多糖的 PBS 溶液混 （激发波长 492 nm，发射波长 518 nm）测定荧光强
合后冰浴超声处理。经 60 ℃ 减压旋蒸去除有机溶 度，并根据标准曲线计算荧光标记取代度。
剂，加入 PBS 后超声分散，最终通过 0.22 μm 滤膜 2.4.3 在离体皮肤中的毛囊靶向作用研究 取巴
3 次过滤制得脂质体（DOP-lip、MDOP-lip、LDOP- 马香猪猪皮进行体外透皮实验（in vitro penetration
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lip） 。采用单因素实验设计，以粒径以及 PDI 为 test，IVPT），将其剪成适当大小；用小棒将指甲油
评价指标，系统考察多糖、卵磷脂、胆固醇的比例以 堵塞于巴马香猪的皮肤毛囊处，对照组用等量的指
及超声时间对脂质体形成的影响。 甲油堵塞空白位置（非毛囊处），以确保两组有效透
2.3 脂质体的表征 皮面积保持一致，待自然风干后即得实验组“毛囊
分别配制鱼精蛋白（10 mg/mL）与 10% 曲拉 堵塞组”与对照组“毛囊开放组”。将皮肤固定于
通-100 溶液 ，各取 100 μL 与待测脂质体等体积混 Franz 扩散池中，放入搅拌子，注满生理盐水，给药
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合。纯水 5 mL 稀释后离心（6 000 r/min,30 min），取 池注入荧光强度相同的 FITC-lip、F-DOP-lip、F-
上清液经苯酚-硫酸显色法处理，于 488 nm 测定吸 MDOP-lip、F-LDOP-lip 溶液，保持磁力搅拌（400
收度。通过公式计算包封率（EE）与载药量（DL）。 r/min）和恒温水浴（32 ℃），分别于 1、2、4、8 h 时
采用粒径仪对脂质体的粒径、PDI 和 Zeta 电位进行 间点取样，用生理盐水擦洗皮肤表面残留的荧光
测量，并用透射电子显微镜（TEM）观察样品的形态 溶液，并用滤纸吸干水分。每组实验设置 3 个平行
与样貌。 样本。取皮肤中央 0.2 cm×0.2 cm 区域进行冷冻包
2.4 DOP-lip、MDOP-lip、LDOP-lip 的毛囊靶向 埋及切片处理，采用倒置荧光显微镜观察荧光渗透
性研究 情况
2.4.1 荧光标记 精密称取不同相对分子质量的 2.5 细胞的增殖、保护作用以及摄取机制研究
多糖粉末，将其溶解于二甲基亚砜（DMSO）中。随 2.5.1 MTT 法检测 3 种相对分子质量脂质体对人
后，按顺序加入吡啶、异硫氰酸荧光素（FITC）以及 源真皮毛乳头细胞 (HDPs) 的促增殖作用 HDPs
催化剂二月桂酸二丁基锡，置于 95 ℃ 油浴环境中 培养在 90% 含双抗的 DMEM 高糖培养基，10%
搅拌反应 2 h。反应结束后，加入 2 倍体积的乙醇使 Gibco 胎牛血清的完全培养基中，培养设置条件为
多糖沉淀，抽滤后得到黄绿色沉淀。接着用 1 倍体 37 ℃、5% CO 。取对数生长期的 HDPs 细胞接种
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积的乙醇对沉淀进行抽滤洗涤，之后将沉淀溶于纯 于 96 孔板上，分别与 DOP-lip、MDOP-lip、LDOP-
水中。将所得溶液装入透析袋进行透析纯化，经冷 lip 溶液共孵育 24 h，之后加入质量浓度为 1 mg/mL
冻干燥处理后，即可获得异硫氰酸荧光素（FITC）标 的 MTT 溶液，在避光条件下继续培养 4 h。孵育结
记的石斛多糖（F-DOP、F-MDOP、F-LDOP）。采用 束后，每孔加入二甲基亚砜（DMSO）100 μL，置于摇
荧光标记的 F-DOP、F-MDOP、F-LDOP 同“2.2”项 床中振摇 10 min。最后使用酶标仪在 490 nm 波长
下方法制备脂质体，得到 F-DOP-lip、F-MDOP-lip、 下测定吸收度，并依据此计算细胞存活率。
F-LDOP-lip。 2.5.2 对损伤细胞的保护作用 采用二氢睾酮
2.4.2 FITC 标准曲线绘制及荧光强度测定 精密 （DHT）构建 HDPs 细胞损伤模型，具体操作如下：
称量 FITC，用 PBS 溶液在量瓶中溶解并定容，配制 首先，配制不同浓度的 DHT 溶液并加入细胞悬
成 2 μg/mL 的 FITC 溶液作为母液。将母液进行梯 液，通过观察细胞的存活状况来筛选出最佳的 DHT
度稀释，得到浓度依次为 2、1、0.5、0.25、0.125、 实验浓度。随后，取处于对数生长期的 HDPs 细胞
0.062 5 μg/mL 的标准溶液，以 PBS 溶液为空白对 接种于 96 孔板，分别设置 3 组进行培养：空白组