Page 101 - 《中国药科大学学报》2026年第2期

第 57 卷第 2 期 夏 丽，等：靶向毛囊的 3 种相对分子质量铁皮石斛多糖脂质体治疗雄激素性脱发的效应研究 227

（仅加入 DMEM 高糖培养基）、模型组（加入溶解有 行给药，具体为：空白组（上下午涂抹生理盐水）、阳
50 μmol/L DHT 的 DMEM 高糖培养基）、实验组（加 性对照组（上午 0.25% 睾酮溶液+下午 2% 米诺地尔
入溶解有 50 μmol/L DHT 以及 DOP-lip、MDOP-lip、 溶液）、空白脂质体组（上午 0.25% 睾酮溶液+下午
LDOP-lip 的 DMEM 高糖培养基）。将这 3 组细胞 空白脂质体溶液）、DOP-lip 组（上午 0.25% 睾酮溶
培养 48 h 后，计算各组的细胞存活率。 液+下午 DOP-lip 溶液）、MDOP-lip 组（上午 0.25%
2.5.3 细胞摄取定性和定量分析 为考察将多糖 睾酮溶液+下午 MDOP-lip 溶液）、LDOP-lip 组（上
制备成脂质体是否改善细胞摄取效果，以 1.5×10 5 午 0.25% 睾酮溶液+下午 LDOP-lip 溶液）。每日给
D 相对分子质量的 DOP-lip 为代表进行研究。取对 药时观察并拍照记录小鼠背部毛发生长情况以及
数生长期的 HDPs 细胞接种于 12 孔板，加入相同荧 背部由粉色变黑至长出毛发的时间。
光强度的 FITC、F-DOP、FITC-lip、F-DOP-lip、孵 2.6.2 HE 染色及皮肤组织学观察 连续给药
育 4 h，用倒置显微镜定性和流式细胞仪定量观察 28 d 后，对小鼠进行麻醉并脱毛处理。随后剪取其
HDPs 细胞的荧光摄取情况。 背部皮肤组织，立即放入 4% 多聚甲醛固定液中，
2.5.4 入胞机制的研究 取对数生长期的 HDPs 在 25 ℃ 条件下固定 24 h。固定完成后，用 PBS 冲
细胞接种于 12 孔板，分别加入 1 mL 阿米洛利（50 洗组织，接着进行乙醇脱水，之后进行石蜡包埋。

µmol/L 巨胞饮通路抑制剂）、甲基-β-环糊精（8 使用切片机将组织制备成厚度为 3 μm 的皮肤切
mmol/L；小窝蛋白介导内吞通路抑制剂） [20] 及氯丙 片，经二甲苯脱蜡、乙醇复水操作后，开展 HE 染
嗪（10 µg/mL；网格蛋白介导内吞通路抑制剂） [21] 色：先用苏木精染色 5 min，再用 1% 盐酸乙醇溶液
预处理 4 h 阻断内吞通路。随后与 F-DOP-lip 共孵 分化 2 s，随后用伊红染色 1 min。染色结束后，对
育 4 h，经胰酶消化中止反应后，1 500 r/min 离心收 切片进行脱水透明处理，然后封片。最后，使用倒
集细胞沉淀。PBS 重悬后通过流式细胞术定量分 置显微镜观察并记录小鼠皮肤切片的结构、厚度变
析荧光强度，表征不同内吞抑制条件下纳米颗粒的 化以及毛囊的生长情况。
细胞摄取效率，探索 DOP-lip 的入胞机制。
3 结 果
2.6 DOP-lip、MDOP-lip、LDOP-lip 对雄激素性
脱发小鼠的生发作用 3.1 脂质体的制备与表征
2.6.1 雄激素性脱发模型小鼠的建立与给药 本研究通过还原糖生成量（图 1-A）间接反映
C57BL/6J 小鼠经腹腔注射乌拉坦麻醉后，剃除背部 酶解效率。结果显示，随着酶解时间增加，还原糖
毛发（2 cm×4 cm），脱毛膏脱净，以脱毛日为实验第 含量递增，初步证明了酶解时间对降解效率的调控
0 天。此后按照上午涂抹 0.25% 睾酮溶液（溶剂为 作用。测定得 DOP、MDOP 以及 LDOP 的相对分
3
5
乙醇-丙二醇，4∶1），下午涂抹相应给药溶液方式进 子质量分别为 1.5×10 、4.05×10 和 4 7.50×10 D。

A B C D

0.5 100 nm 100 nm 100 nm
0.4
Absorbance 0.3
0.2
0.1
0
0 1 2 3 4 5 6 7
Enzymolysis time/h
Figure 1 Amount of reducing sugar generated indirectly reflects the enzymatic hydrolysis efficiency graph and TEM images of high,
medium and low molecular weight polysaccharide liposomes ( x ± s, n=3)
A: Enzymatic hydrolysis efficiency; B: DOP-lip; C: MDOP-lip; D: LDOP-lip

通过对各处方因素的研究，得出其制备的最佳 TEM 结 果 如 图 1-B−1-D 所 示 ， 制 备 而 成 的
处方和工艺。在此条件下制备的 DOP-lip、MDOP- DOP 脂质体为类球形，粒径与马尔文粒径测定仪结
lip、LDOP-lip 平均粒径、PDI、Zeta 电位、包封率 果相近，负载多糖后的脂质体指纹特征消失，提示
（EE）、载药量（DL）如表 1 所示。 DOP 可能修饰在脂质体外围。