Page 76 - 《中国药科大学学报》2025年第4期

472 学报 Journal of China Pharmaceutical University 2025, 56(4): 469 − 477 第 56 卷

滴加抗荧光淬灭剂封片，在激光共聚焦显微镜 600 **
FV3000 下观察并拍照。 *

2.9 细胞免疫荧光染色 400 ##
C2C12 细胞用 4% 多聚甲醛溶液固定 15 min， Grip strength/g
再 用 PBS 洗 3 次 ， 每 次 5 min。 然 后 滴 加 0.5%
Triton 透化 15 min，PBS 洗涤。后续实验操作同 200
“2.5”项。

2.10 蛋白免疫印迹分析 0
弃去培养基，PBS 浸洗后加入 SDS 裂解液和 WT Model ZLY16 Simvastatin
4 ×上样缓冲液收样，并于 95 ℃ 金属浴中加热 15
min。蛋白样品通过十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝 Figure 2 ZLY16 treatment improves grip strength of mdx
胶电泳分离并转移至 PVDF 膜上，并用 5% 脱脂奶 mice（ x ± s, n=6）
Grip strength of mdx mice after 6 weeks of treatment
粉室温封闭 1 h。用 TBST 洗膜（10 min/次），将膜 ## P < 0.01 vs WT group; *P < 0.05, **P < 0.01 vs model group
与 一 抗 （ myogenin、 CPT-1a、 PPARβ 和 GAPDH）
3.2 ZLY16 改善 mdx 小鼠骨骼肌假性肥大
4 ℃ 孵育过夜。第二天洗膜（10 min/次），二抗室温
称量小鼠体重及 TA、GAS 重量，计算肌肉重
孵育 1 h，洗膜、曝光，最后通过 Image J 软件扫描蛋
量系数（骨骼肌重量/体重）。结果如图 3 所示，模型
白灰度值并以 GAPDH 为内参进行归一化处理。
组小鼠的 TA 重量系数相较于 WT 小鼠有增加的趋

2.11 HE 染色图像定量分析
势，ZLY16 和 simvastatin 组小鼠肌肉重量系数减
将 HE 染色的图像导入 Image J 软件，调整图
少；模型组小鼠的 GAS 重量系数相较于 WT 小鼠
片对比度和亮度，使用 Image J 的阈值分割功能分
明 显 增 加 （ P<0.05） 。 与 模 型 组 相 比 ， ZLY16 和
离炎性细胞浸润区域并标记，最后通过 Image J 计
simvastatin 给药后小鼠的 GAS 重量系数均显著降
算选定区域炎性细胞的总面积。
低（P<0.05），表明 ZLY16 能降低 mdx 小鼠肌肉重

2.12 免疫荧光图像定量分析
量系数，改善 mdx 小鼠骨骼肌假性肥大的症状。
将免疫染色的图像导入 Image J 软件，调整图

片对比度和亮度，使用 Image J 的阈值分割功能分 A 2.5 B 8 #
离 eMyHC 或 Fibronectin 的面积并标记，最后通过 2.0 * 6 * *
Image J 计算 eMyHC 或 Fibronectin 的面积。 1.5

2.13 统计学分析 TA/body weight/(mg/g) 1.0 GAS/body weight/(mg/g) 4
使用 GraphPad Prism 9.0 软件进行数据处理及 0.5 2
分析。所有数据采用 x± s表示，多组数据间分析全 0 0
部使用单因素方差分析（One-Way ANOVA），以 WT Model ZLY16 Simvastatin WT Model ZLY16 Simvastatin
P<0.05 表示差异显著具有统计学意义。

3 结 果 Figure 3 ZLY16 decreased skeletal muscle coefficient in mdx
mice（ x ± s, n=6）

A: Tibialis anterior (TA) coefficient (weight of TA/body weight) of
3.1 ZLY16 改善 mdx 小鼠肌无力 mdx mice; B: Gastrocnemius (GAS) coefficient (weight of
给药 6 周后检测小鼠肌抓力以评价各组小鼠 GAS/body weight) of mdx mice
# P < 0.01 vs WT group; *P < 0.05 vs model group
骨骼肌功能。结果如图 2 所示，模型组 mdx 小鼠前
肢肌抓力较 WT 小鼠明显减弱（P<0.01），表明 mdx 3.3 ZLY16 明显改善 mdx 小鼠骨骼肌损伤
小鼠存在严重的肌无力症状。相较于模型组，给药 对各组小鼠的 TA、GAS 和 DIA 进行组织病
6 周后，ZLY16 组和 simvastatin 组小鼠前肢肌抓力 理学观察与分析。结果如图 4 所示，WT 小鼠的肌
都显著增加（P<0.01，P<0.05），表明 ZLY16 能够增 肉组织结构清晰完整，肌纤维排列整齐紧密，细胞
加 mdx 小鼠肌抓力，改善 mdx 小鼠肌无力症状。 核分布在肌膜四周。模型组 mdx 小鼠的肌纤维大