Page 73 - 《渔业研究》2026年第3期

366 渔 业 研 究 第 48 卷

1.2 仪器与设备 雾化气为 55 psi；辅助气为 55 psi；离子源温度为 600 ℃；
液相色谱−串联四级杆质谱仪 Agilent 1200-Agilent 检测方式为多反应监测（Multiple reaction monitoring，
6410，配备电喷雾离子源（AB Sciex 公司） ；固相 MRM） ；定性离子、定量离子及碰撞能量等质谱
萃取装置 Agilent VacElut SPE（安捷伦公司） ；天 参数详见表 2。

平：感量 0.01 mg（Sartorius 公司） 、感量 0.01 g
表 2 CAP、TAP、FF 的质谱参数
（赛多利斯科学仪器有限公司） ；离心机 3-30 K（日
Tab. 2 Mass spectrometry parameters of CAP,
本日立公司） ；涡旋混合器 MS5（IKA 公司） ；自 TAP, and FF
动浓缩工作站 N-EVAP（Organomation 公司） 。
目标化合物 母离子/（m/z）子离子/（m/z） 碰撞能量/eV
1.3 样品前处理方法 Target compounds Parent ion Daughter ion Collision energy
取试样 2 g（精确至 0.01 g） ，置于 50 mL 离 氯霉素 CAP 321 152 * 23
257 16
心管中，依次加入适量同位素内标工作液、0.3 mL
氨水和 10 mL 乙酸乙酯，2 500 r/min 涡旋混匀 2 min， 甲砜霉素 TAP 354 185 * 26
290 14
振荡提取 10 min，于 6 000 r/min 离心 10 min，转
336 * 14
移上清液于 50 mL 离心管中，残渣再加 10 mL 乙 氟苯尼考 FF 356
185 14
酸乙酯重复提取 1 次，合并上清液，45 ℃ 沙浴氮
氯霉素-D 5 CAP-D 5 326 157 23
气吹干。
甲砜霉素-D 3 TAP-D 3 357 185 26
残渣加入 4 mL 甲醇−水溶液复溶，再加入 4 mL
氟苯尼考-D 3 FF-D 3 359 339 * 14
甲醇−水溶液饱和的正已烷，2 500 r/min 涡旋混匀
*
注： 为定量离子。
1 min，6 000 r/min 离心 10 min，弃去上层正已烷， Note: means quantitative ions.
*

重复该除脂步骤 1 次，保留下层溶液，待净化。C 18
固相萃取小柱依次用 3 mL 甲醇、3 mL 水活化，上 1.4.3 定性与定量分析
每种被测组分选择 1 个母离子、2 个以上子离
样后用 3 mL 水淋洗，3 mL 甲醇洗脱，收集洗脱液
子，在相同实验条件下，样品中待测物和内标物的
于 45 ℃ 沙浴氮气吹干。残留物用 1.00 mL 初始流
保留时间（Retention time，RT）之比，也就是相
动相溶解定容，经 0.22 µm 有机滤膜过滤后，上机
对保留时间，与标准溶液中对应的相对保留时间偏
检测。
差在±2.5% 之内；且样品中各组分定性离子的相对
1.4 仪器分析条件
丰度与浓度接近的标准溶液中对应的定性离子的相
1.4.1 色谱条件
对丰度进行比较，若偏差不超过表 3 规定的范围，
色谱柱为 Waters BEH C （50 mm×2.1 mm，
18
1.7 μm） ，柱温为 30 ℃，进样量为 1 μL，流动相 则可判定为样品中存在对应的待测物。

A 为水，流动相 B 为甲醇，液相洗脱程序详见表 1， 表 3 定性确证时相对离子丰度的最大允许偏差
保持 3 min。流速为 300 μL/min。 Tab. 3 Maximum permissible deviation of relative ion

表 1 液相洗脱程序 abundance during qualitative confirmation
Tab. 1 Liquid phase elution procedure 相对离子丰度/% 允许偏差/%
Relative ion abundance Permissible deviation
时间/min 流动相 A/% 流动相 B/%
Time Mobile phase A Mobile phase B ＞50 ±20
0 70.0 30.0 ＞20，≤50 ±25
2.00 70.0 30.0 ＞10，≤20 ±30

3.00 5.0 95.0 ≤10 ±50

6.00 5.0 95.0
1.5 标准曲线
8.00 70.0 30.0
按仪器的色谱、质谱条件，将标准工作液和试

1.4.2 质谱条件 样测试液等体积进样测定，CAP 以 CAP-D 为内
5
采用电喷雾离子源（Electrospray ionization， 标 ， TAP 以 TAP-D 为 内 标 ， FF 以 FF-D 为 内
3
3
ESI）；负离子扫描；气帘气为 35 psi；碰撞气为 7 psi； 标，内标法定量，定量离子采用丰度最大的二级特