Page 23 - 《渔业研究》2026年第3期

316 渔 业 研 究 第 48 卷

等病原微生物作为测试对象，对该方法进行特异性 的检测结果均为阴性。表明本研究建立的的 CyHV-3
评价。结果如图 5 所示，仅 CyHV-3 作为被检测样 RAA-CRISPR/Cas12a 检测方法具有良好的特异性，
品时，可以出现扩增曲线和明显的荧光，其他样品 与其他常见的水生动物病原体不发生交叉反应。

a) 1 2 3 4 5 6 7
b)
CyHV-3
10 000 CyHV-2
荧光强度 Fluorescence 5 000 Aeromonas veronii
蓝光灯 GCRV-Ⅰ
LED GCRV-Ⅱ
维氏气单胞菌
NC
紫外光
UV 0
0 10 20 30
时间/min Time
图 5 CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a 方法特异性评价
Fig. 5 Specificity evaluation of CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a method

注：a. 1~7 表示不同病毒样品经 CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a 反应后在 470 nm 波长 LED 蓝光和 UV 光源下的荧光结果
（样品依次为 CyHV-3、CyHV-1、CyHV-2、GCRV-Ⅱ、GCRV-Ⅰ、SVCV、CEV）；b. CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a 荧光曲线。
Notes: a. 1−7 indicate fluorescence results of different viral samples after the CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a reaction, measured
under 470 nm wavelength blue light and UV light source (the samples are CyHV-3, CyHV-1, CyHV-2, GCRV-Ⅱ, GCRV-Ⅰ, SVCV,
and CEV in sequence); b. Fluorescence curves of the CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a reaction.
2.7 临床样品检测 RAA-CRISPR/Cas12a 方法检测呈阳性的样品采用
CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a 方法结果检测显 PCR 方法同样能被检出（图 6d） 。2 种方法检测
示，在 10 份临床样本中，有 5 份样品呈阳性（图 6a、 结果的阳性符合率、阴性符合率和总符合率均为
图 6b、图 6c） 。PCR 方法检测结果显示，CyHV-3 100%。

a) 1 2 3 4 5 6 b) 1 7
10 000 2 3 8 9
荧光强度 Fluorescence 6 PC
蓝光灯 4 5 10
NC
LED 5 000

0
0 10 20 30
7 8 9 10 NC PC
时间/min Time
1 2 3 4 5 6
c) d)
bp M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 NC PC
2 000
1 000
紫外光 750
UV 500
250
100
7 8 9 10 NC PC
图 6 CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a 方法和行标 PCR 法检测结果
Fig. 6 Detection results of CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a method and standard PCR method
注：a. 在 470 nm 波长 LED 蓝光下，CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a 反应的荧光强度；b. CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a 荧
光曲线；c. 在 470 nm 波长紫外光源下 RAA-CRISPR/Cas12a 反应的荧光强度；d. PCR 方法对临床样品的检测结果；1~10. 临
床样本；PC. 阳性对照，以 CyHV-3 阳性 cDNA 为模板；M. DNA 标记 2000。
Notes: a. CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a fluorescence intensities under 470 nm wavelength LED blue light; b. CyHV-3 RAA-CRISPR/
Cas12a fluorescence curves; c. CyHV-3 RAA-CRISPR/Cas12a fluorescence intensities under 470 nm wavelength ultraviolet light
source; d. PCR detection results for clinical samples; 1−10. Clinical samples; PC. Positive control, using CyHV-3 positive cDNA as
template; M. DNA marker 2000.