Page 112 - 《渔业研究》2026年第3期

第 3 期 林晓裕等： 河豚毒素的提取纯化及医学药理活性研究进展 405

量和共存的杂质都具有差异。因此，从生物组织获 程方案，将膜分离法等应用于 TTX 的纯化，显著
得的 TTX 粗提液通常共存同系物（TTX 同分异构 缩短了传统提取 TTX 方法的生产周期，更好地保
体）及蛋白、色素、脂类等复杂杂质，需通过多级 持了 TTX 的生理活性，提高了提取精制纯化效率
纯化以满足后续构效、安全与递送研究的纯度与批 且获得的 TTX 纯度高达 99%。邓志科 [14] 通过超滤

间一致性的要求。TTX 纯化主要基于 TTX 的结构 纳滤反渗透膜联用来纯化 TTX，杂质总去除率可
和性质（极性差、分子量）而实现的，其技术主要 达 94.17%，TTX 总回收率可达 84.86%，体积浓缩
包括膜分离法、离子交换柱层析法、凝胶过滤柱层 至原来的 1/23.5。宋江等 [15] 通过使用含有氨基基
析法和液相色谱纯化技术等。不同纯化技术的原 团、羧基基团的吸附膜对经过离子交换树脂纯化后
理、优缺点等如表 1 所示。 的 TTX 进行进一步的纯化处理，由于氨基基团和
2.1 膜分离法 羧基基团可与 TTX 的羟基基团之间形成氢键，从
膜分离法是一种基于孔径筛分、道南效应等原 而实现 TTX 的高度纯化。
理，在外力驱动下将混合物中的组分分离的技术， 2.2 柱层析法
具有能耗低、操作简单、无需加入化学药剂等优 柱层析法是一种用于分离混合物中不同组分的
点。膜的种类繁多，按照孔径从大到小依次为微滤 分析和分离技术，它利用样品中各组分在固定相和
膜、超滤膜、纳滤膜、反渗透膜。因此，可利用膜 流动相之间的不同分配或吸附特性，使各组分移动
孔径的不同来分离不同分子量杂质 [11-12] 。易瑞灶 速度不同而实现分离 [16-17] 。在纯化 TTX 的过程中，
等 [13] 根据 TTX 在水中几乎不溶解的特点，设计了 柱层析法具有可分离杂质与类似物、获高纯度产物、
一套成盐水浸提法、膜分离与多级层分离的工艺流 适配不同纯化规模、过程可控且回收率稳定等优势。

表 1 不同 TTX 纯化技术对比
Tab. 1 Comparison of different TTX purification technologies
技术 原理 应用阶段 优点 缺点
Technologies Principles Application stages Advantages Disadvantages
离子交换柱层析法 带电基团与 TTX 静电吸附 溶质必须带电荷、
Ion-exchange chromatography 初步纯化 选择性强、亲和力高 易受 pH 影响
凝胶柱层析法 温和、保持分子的活性和 分辨率较低、需
Gel column chromatography 分子大小差异 中间段纯化 稳定性 大量洗脱剂
膜分离法 结合压力驱动孔径筛分 初步/中间段纯化 能耗低、操作简单、无需 膜易污染、无法
Membrane separation 加入化学药剂 截留小分子
液相色谱纯化技术 操作简便、收率高、且适 设备成本高、通
Liquid chromatography 固定相/流动相分配系数差异 精制 于自动化控制 量低
purification technology
特异性免疫磁珠技术 特异性强、可直接捕获目 配体制备复杂、
Specificity immunomagnetic 与特异性分子特异性结合 精制 标物 无法规模化
beads technology

2.2.1 离子交换柱层析法 除去大分子后，再运用葡聚糖凝胶 G-10 过柱除去
离子交换柱层析法是一种利用离子交换树脂 杂质，经液相色谱精制后得到 TTX 纯品，其纯度
作为固相材料，通过样品中各种离子的亲和力和交 为 99.5%。苏捷等 [22] 将从月腹刺鲀的内脏中提
换能力进行分离的技术。在纯化 TTX 的应用中， 取得到的 TTX 经过活性炭柱、D152 阳离子交换柱
离子交换柱层析法通过树脂与 TTX 之间的静电吸 和 Bio-Gel P2 分子筛层析后，获得纯度大于 80%
附作用，从而实现 TTX 的分离和富集，具有选择 的 TTX。
性强、操作简便和亲和力高等优点 [18-19] 。王瑞瑞 2.2.2 凝胶柱层析法
等 [20] 以假睛东方鲀肝脏为原料研究 TTX 的纯化效 凝胶柱层析法，又称为分子筛层析法，是一种
果，结果表明使用 D152 弱酸性阳离子交换柱对弱 基于分子量大小差异进行分离的技术。该方法通过
碱性的 TTX 进行纯化的效果最佳，且损失率低，TTX 填充有微孔凝胶的柱子，使样品中的分子在凝胶中
纯度达到 80%，但存在无法分离 TTX 和其同系物 分布和移动，从而实现分离 [23] ，可保持生物分子的
的弊端。崔建洲等 [21] 以假睛东方鲀肝脏为原料， 活性和稳定性，是一种较为温和的分离方法。Suo
将 TTX 粗提液用大孔树脂 D201 和阳离子交换树 等 [24] 通过对海洋扁虫（Planocera multitentaculata）
脂 IRC-86 净化后，经分子量为 1 000 kDa 的超滤膜 的粗提液进行活性炭柱和 Bio-Gel P 凝胶柱净化处