Page 112 - 《渔业研究》2026年第2期
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第 2 期              苏    捷等： 腹泻性贝类毒素免疫荧光层析快速检测卡的测试与分析                                   255

              adenosine monophosphate，cAMP）数量增多，进              科技有限公司共同研发、批量生产，三批次的产品
              而引发调节小肠钠盐分泌的蛋白磷酸化，最终引起                           均在常温实验室中放置超过             6  个月后开展验证实
              腹泻、肿瘤等严重健康问题            [10-11] 。近年来，因摄入         验。采用    GB 5009.212—2016《贝类中腹泻性贝类
              受环境毒素污染的贝类产品而引发的食品安全事件                           毒素的测定》的方法         [25] ，通过  LC-MS/MS  验证为
              时有发生     [12] ，不仅威胁公众健康，也对贝类产业                   阴性或阳性的太平洋牡蛎（Crassostrea gigas） 、缢
              的声誉和经济效益造成了不良的影响                  [13] ，其根本      蛏（Sinonovacula constricta） 、菲律宾蛤仔（Rudit-
              原因是缺乏快速、简易且适合基层使用的贝类毒素                           apes philippinarum）3  种贝类。福建省水产研究所
              监测的技术方法，导致贝类毒素安全预警不及时，                           科技伦理（审查）委员会审批同意动物实验，批准
              因此筛选一种快速、准确、简便的毒素即时检验方                           编号为   FRIF21-2508-01。
              法（Point of care testing，POCT） ，对有效降低毒             1.2 实验方法
              素安全事件具有重要意义。                                      1.2.1 标准溶液配制
                  目前，DSP    的检测方法主要包括小鼠生物法、酶                       母液（1 mg/mL） ：精确称取        10.0 mg OA  标准
              联免疫吸附测定法（Enzyme linked immunosorbent             品，用甲醇−水（1∶1，V/V）溶解定容至                 10 mL
              assay，ELISA）和液相色谱−质谱联用法（Liquid                   棕色容量瓶，−80 ℃      避光保存； 中间液（10 μg/mL）：
              chromatography-tandem mass spectrometry，LC-MS/   取  100 μL  母液，用  0.01 mol/L 磷酸盐缓冲液（PBS，
              MS）等   [10, 14] 。尽管这些方法在灵敏度和特异性方                 pH 7.4）稀释至    10 mL，−20 ℃   保存≤3   个月；工
              面表现优异，但都需要专业的实验室、相关设备和                           作液：临用前以阴性贝类基质提取液按梯度稀释
              专业技术人员，检测成本高、耗时长                  [15] ，难以实      至  10 μg/mL。
              现监管部门在贝类安全预警监测中及时、高效的抽                            1.2.2 加标样本制备
              样筛查。                                                 取  50 g  去壳贝肉，匀浆    3 min（间歇脉冲模式） ；
                  免疫荧光层析技术（Immunofluorescence chro-            取（1.0±0.02）g  匀浆物，分别添加          OA  工作液   5、
              matography，IFC）作为一种新兴的快速检测方法，                    20、40、80 μL，涡旋振荡      2 min，25 ℃  静置  30 min,
              因高灵敏度、高特异性、操作简便和检测速度快                            对应终浓度分别为        50、200、400、800 μg/kg；
              等优势，在食品安全检测领域展现出广阔的应用                             1.2.3 样品分析检测
              前景  [16-18] 。该技术通过荧光标记毒素抗体，结合毛                       样品的提取参考       GB 5009.212—2016  的方法 [25] 。
              细管层析技术实现快速分离和检测，能在短时间                            精确称取     0.5 g  样品至  2 mL  聚丙烯离心管；加入
              内完成对待测物的定性或定量分析              [19] 。近年来，IFC       0.5 mL  酸化甲醇（含    0.1%  甲酸） ，涡旋   3 min；4 ℃
              已在农药残留、病原微生物和毒素检测等领域取                            10 000×g  离心  10 min；取  100 μL  上清液，加入  200 μL
              得较好的使用成果         [20-23] ，但其在  DSP  检测中的应        PBS  溶液进行震荡混匀，即为待测处理液。
              用研究仍处于起步阶段。OA              是  DSP  组成的主要             孵育器   37 ℃  预热  30 min，荧光读卡仪（由厦
              成分，本研究拟通过应用前期开发的一种适用于                            门希吉亚医学科技有限公司自主研发）进行开机自
              基层实验室快速检测卡，检测贝类样品中                   OA  的含      检；将   80 μL  待测处理液垂直滴加至加样孔，启动
              量，为贝类安全预警监测提供一种新的快速高效                            定时孵育（8 min±15 s） ；将孵育好的检测卡插入
              的检测方法，从而保障贝类产业的健康、可持续                            荧光读卡器，读卡器读取荧光强度后，自动通过四
              发展。                                              参数逻辑曲线拟合计算浓度值。
                                                                1.2.4 检测限（Limit of detection，LOD）和定
               1 材料与方法
                                                               量限（Limit of quantitation，LOQ）分析
               1.1 实验材料                                            依据  ICH Q2（R1）指南推荐方法         [26] ，LOD  定
                  OA  标准品（纯度≥98%，CAS No. 78111-17-8）           义为空白样本测定值的平均值（Average value，
              购自加拿大国家研究委员会海洋生物毒素标准物质                           AV）加   3 倍标准差（Standard deviation，SD） ，即
              中心（NRCC CRM-OA） ，工作溶液配制参照                ISO     AV+3SD；LOQ    为  AV+10SD；空白样为阴性贝类
              17025  实验室质量管理规范执行          [24] 。腹泻性贝类毒         基质提取液。
              素快速检测卡（批号：25240501/25240601/25240602）             1.2.5 准确度和精密度分析
              及检测系统由福建省水产研究所和厦门希吉亚医学                               通过基质加标回收法评估检测卡对不同种贝类
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