Page 89 - 《渔业研究》2026年第1期
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86                                   渔  业  研  究                                     第 48 卷

              主要集中于总脂质的脂肪酸分析               [7-8] ，但是绝大多        50 μg/mL 二丁基羟基甲苯（BHT） 。宁波海洋研究
              数脂肪酸在生物体内并非以游离态存在。迄今为                            院批准动物实验，批准编码为             DWLL-2025-001。
              止，关于银鲳肌肉中脂质组成的系统性研究，特别                            1.3 液相色谱条件
              是各类脂质分子结构的精确鉴定及组成分析，尚未                               运 用  Thermo  Scientific   Dionex   UltiMate TM
                                                                                       TM
                                                                                               TM
              见报道。脂质是海水鱼类必需的营养要素，与生物                           U3000  反相液相色谱仪，色谱柱为            Hypersile Gold
              体的代谢活动与生长发育密切相关                [9-11] ，也是能量      C18（100 mm×2.1 mm，3 μm，美国     Thermo Fisher），
              的主要来源      [12] ，而且影响水产品的风味、质地及                  样品进样量为       3 μL。流动相     A：乙腈/水（6∶4，
              营养价值等     [13] 。因此，本研究主要利用         Q-Exactive    V/V） ，流动相     B：异丙醇/乙腈（9∶1，V/V） 。
              静电场轨道阱高分辨液相色谱与质谱联用系统，对                           流动相   A、B   均分别加入      0.1%  甲酸和  0.05%  氨水
              银鲳肌肉样品中的总脂质进行直接分析；通过精确                           （作为助离子化试剂） ，流速为            0.2 mL/min。洗脱程
              鉴定各类脂质的分子结构，分析银鲳的脂质营养组                           序 为 ： 0~15.0  min， 60%~45%A； 15.0~18.0  min，
              成。本研究旨在为银鲳肌肉的营养评价及其在食品                           45%~35%A；18.0~26.0 min，35%A；26.0~28.0 min，
              加工、产品开发等领域的应用提供基础数据和科学                           35%~0%A；28.0~30.0 min，0%A；30.0~30.5 min，
              依据。                                              回到初始梯度      60%A；30.5~40.0 min，60%A，色谱
                                                               柱在初始条件下平衡         20.0 min。样品室温度为      8 ℃，
               1 材料与方法
                                                               色谱柱温度为      45 ℃。
               1.1 试剂                                           1.4 质谱条件
                                                                                                        TM
                  总脂质标准品包括甘油三酯（Triglycerides，                      采用   Q-Exactive 静电场轨道阱（Orbitrap ）
              TAG） 、甘油二酯（Diglyceride，DAG） 、鞘氨醇                 高分辨质谱仪（美国          Thermo Fisher 公司） 、电喷
              （Sphingosine，So） 、神经酰胺（Ceramide，Cer） 、           雾电离源（HESI-Ⅱ） ，在正、负两种离子模式下，
              鞘磷脂（Sphingomyelin，SM） 、单糖鞘脂（Mono-                分别对银鲳肌肉样品进行检测，质量范围：200~
              saccharide sphingolipids，CerG1） 、磷脂酰胆碱（Ph-       2 000 m/z。质谱仪在数据依赖采集模式下（Full
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              osphatidylcholine，PC） 、磷脂酰甘油（Phosphatidy-        MS-ddMS ）运行，自动在一级质谱（Primary mass
              lglycerol，PG，16:0-d31-18:1） 、磷脂酰乙醇胺（Ph-          spectrometry，MS）和二级质谱（Tandem mass spec-
              osphatidylethanolamine，PE） 、磷脂酰肌醇（Phos-          trometry，MS/MS）间采集切换。自动增益控制目
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              phatidylinositol，PI） 、磷脂酰丝氨酸（Phosphati-          标值  1e  MS、2e  MS ；喷雾电压为        3.5 kV，离子
              dylserine，PS） 、磷脂酸（Phosphatidic acid，PA）         传输管温度为      350 ℃，鞘气压为       45 arb，辅助气压
              同位素标准品；溶血性的磷脂标准品，包括溶血磷                           为  10 arb，气化室温度为      350 ℃；二级质谱选择高
              脂酰胆碱（Lysophosphatidylcholine，LPC） 、溶血            能量碰撞，正离子模式下碰撞能量为                   25、30 V，
              磷脂酰甘油（Lysophosphatidylglycerol，LPG） 、溶           负离子模式下碰撞能量为              20、24、28 V。进样
              血磷脂酰乙醇胺（Lysophosphatidyl ethanolamine，           前，对仪器分别进行正、负离子校正。
              LPE） 、溶血磷脂酰丝氨酸（Lysophosphatidylserine，            1.5 脂质代谢物定性分析
              LPS） 、溶血磷脂酰肌醇（Lysophosphatidylinositol，              基于  Orbitrap TM  质谱仪生成的高分辨率高质量
              LPI） （纯度>99%） ，均购买自美国             Avanti Polar   精度数据，经      Lipidsearch software version 4.1（The-
              Lipids 公司。实验所用的有机溶剂均为色谱级（美                       rmo Scientific™）进行峰识别、脂质鉴定（二级鉴
              国 Sigma-Aldrich  公司） 。                           定） 、峰提取、峰对齐、峰面积或强度计算等处
               1.2 样品采集与处理                                     理，采用    Product search QEX  条件进行搜索，得到
                  以采自宁波舟山海域的野生银鲳作为实验材料。                        每个脂质分子的类别、质量数、保留时间、加合形
              银鲳被捕获后，用清水冲洗表面，取背部肌肉进行                           式、元素组成等信息。然后通过               MS/MS  并结合文
              冷冻干燥，经液氮研磨成粉末。称取                 20 mg  银鲳肌      献报道过的每一类脂的碎裂规律，对每一个脂质分
              肉样品干粉，加入         1∶1  氯仿/甲醇（V/V）混合溶              子的脂肪酸链的组成和位置进行鉴定。
              液，提取总脂质，氮气吹干，甲醇复溶后经                   0.22 μm     1.6 脂质代谢物半定量分析
              超滤膜（美国       Mil-lipore 公司）离心过滤，然后进                  样品中加入脂质标准品，根据待测组分的信号
              行液质分析，取         6  个平行样。所有溶剂中均加入                 强度跟标准物质信号强度之间的相对大小，半定量
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