Page 66 - 《渔业研究》2026年第1期
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第 1 期            陈锦莉等： 培养条件对微拟球藻           FACHB-2541  生长和  EPA  合成的影响                  63

              中以硝酸钠为优化对照的氮源。随后，在光照                             并保持    10 min；检测器温度       260 ℃；进样口温度
              强度   150 µmol/（m ·s） 、乙酸铵为唯一氮源的条                 250 ℃；分流比 1∶40；进样量         1 μL。
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              件下，进一步研究不同氮浓度（50、100、150                  和       1.5 数据处理
              200 mg/L）对微拟球藻       FACHB-2541  生长及油脂积              所有的实验均进行         3  次。实验数据以平均值±
              累的影响。最后，在确定             150 mg/L  氮浓度的乙酸         标准差（Mean±SD）表示。采用           Graphpad Prism 8.0
              铵为适宜氮源后，探究不同光照强度                  [75、150  和     软件进行样本间的比较，包括单因素方差分析及差
              200 µmol/（m ·s）]  对微拟球藻      FACHB-2541  生长      异显著性分析，P<0.05       表示差异显著。
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              和油脂合成的影响。培养过程中，每隔                  2 d  收集微
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              藻细胞，测定培养基中的氮含量以及生物量。实验
              结束后，收集微藻细胞并测定其生化组分及脂肪酸                            2.1 不同氮源下的生长及油脂积累情况
              组成。                                                  由图  1a 可知，微拟球藻        FACHB-2541  在  4  种
               1.4 实验方法                                        氮源下均生长良好。随着培养时间的延长，微拟球
               1.4.1 生物量的测定                                    藻  FACHB-2541  的生物量逐渐增加。其中，微拟
                  取  10  mL  微 藻 培 养 液 至 离 心 管 中 ， 经           球藻  FACHB-2541  以乙酸铵为氮源可获得最高的
              8 000 r/min 离心  10 min 后收集藻细胞，并用蒸馏               生物量    1.63 g/L，与硝酸钠组和氯化铵组均有显
              水洗涤    3  次。将滤纸片（0.45 μm）放入烘箱干燥                  著差异（P<0.05） 。在以氯化铵为氮源的条件下获
              至恒重（W ，g） ；用烘干后的滤纸片过滤藻体，                         得的生物量最低，为           0.79 g/L。此外，微拟球藻
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              随后放入烘箱（80 ℃）中烘干至恒重（W ，g） 。                       FACHB-2541  在不同氮源培养下的氮源消耗情况如
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              采用减法计算微藻生物量（g/L） ，其公式为：                          图  1b  所示，结果显示，微拟球藻           FACHB-2541  对
                          （W 2 −W 1 ）                          氯化铵的消耗最慢，培养结束后培养基中的氮浓度
                  生物量 =              ×1 000
                               10                              为  75.53 mg/L；微拟球藻    FACHB-2541  可更快利用
               1.4.2 氮源浓度的测定                                   乙酸铵进行生长，在第          6  天时，培养基中的氮源几
                  采用二乙酰一肟法（血尿素氮检测试剂盒）测                         乎被消耗完。
              定尿素消耗量；采用氨氮试剂盒测定氨氮消耗量；                               不同氮源培养下的微拟球藻              FACHB-2541 的
              采用   GB 17378.4—2007《海洋监测规范 第         4  部分：     脂肪酸组成及油脂含量见表             1。由表可知，微拟球
              海水分析》规定的方法测定培养基中的硝酸氮浓度。                          藻  FACHB-2541  中的主要脂肪酸为棕榈酸（C16:0） 、
               1.4.3 油脂含量的测定                                   棕榈油酸（C16:1）以及        EPA。其中，总饱和脂肪酸
                  采用磷酸香草醛法        [17]  测定油脂含量，取      1 mL     （Total saturated fatty acids，ΣSFAs）占比为  36.08%~
              藻液经    8 000 r/min  离心  10 min  后，用蒸馏水洗涤         36.54%，平均占比为       36.29%；总单不饱和脂肪酸
              藻泥   3  次。向藻泥中加入       1 mL  浓硫酸并于     100 ℃     （Total monounsaturated fatty acids，ΣMUFAs）占比为
              水浴   10 min  后，立即转移至冰浴中冷却           5 min。随      35.45%~37.20%，平均占比为       36.36%；总多不饱和
              后加入    2.5 mL  磷酸香草醛试剂，37 ℃         水浴反应         脂肪酸（Total polyunsaturated fatty acids，ΣPUFAs）
              10 min。以不含藻体的处理组为空白对照，在酶标                        占比为    26.68%~27.82%，平均占比为        27.29%。然
              仪  528 nm  波长下测定吸光度。                             而，不同氮源培养下微拟球藻             FACHB-2541  的  EPA
               1.4.4 脂肪酸组成及含量的测定                               含量无显著差异，在          19.45%~20.23%  之间。当以
                  取  50 mg  湿藻体，向样品中加入          2 mL  硫酸−      乙酸铵为氮源时，微拟球藻              FACHB-2541  的油脂
              甲醇（V∶V=1∶99）溶液和           100 µL 0.05%  二丁基      含量和    EPA  的产量均最高，分别可达            49.83%  和
              羟基甲苯−甲醇溶液，60 ℃          水浴摇床反应       12 h，加      164.34 mg/L。
              入  2 mL  正己烷和    4 mL  蒸馏水，5 000 r/min  离心           综上，选用乙酸铵为氮源进行微拟球藻                FACHB-
              10 min。取上层正己烷相，经            0.22 μm  滤膜过滤        2541 的培养。
              后，转移至气相样品瓶，采用气相色谱法分析脂肪                            2.2 不同氮浓度下的生长及油脂积累情况
              酸组成    [18] 。条件如下：色谱柱（30 m×0.25 mm×                  由图  2a 可知，以乙酸铵为氮源，在            4  种氮浓度
              0.25  µm） ； 升 温 程 序 ： 100  ℃  维 持  1  min， 以     下，随着培养时间的延长，微拟球藻                 FACHB-2541

              40 ℃/min  升至  210℃，再以    20 ℃/min  升至  250 ℃     的生物量均呈明显的上升趋势。当氮浓度为                  50 mg/L
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