Page 204 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 聂 蒙，等：罗非鱼源无乳链球菌缺失株 ΔcrRNA 与 ΔcpsE 的毒力与免疫效力 50 卷

2 μm 1 2 μm 2 2 μm 3
图版 Ⅰ 无乳链球菌不同菌株的荚膜染色

1. WT 株，2. ΔcpsE 株，3. ΔcrRNA 株；黑色箭头指示荚膜。
Plate Ⅰ Capsule staining of different S. agalactiae strains
1. WT, 2. ΔcpsE, 3. ΔcrRNA; the black arrows indicate the capsular polysaccharides.

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1.04×10 CFU/尾) 菌株相比，ΔcrRNA(LD =1.36× ΔcrRNA 和 ΔcpsE 的免疫保护力，免疫后第 14 天
50
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10 CFU/尾 ) 菌 株 毒 力 下 降 约 130 倍 ， 而 ΔcpsE 再分别以 10 LD 剂量 (1×10 CFU/尾) 的野生株，
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0
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(LD >1.00×10 CFU/尾) 菌株的毒力则下降超过 以腹腔注射的方式攻毒尼罗罗非鱼，观察 14 d。
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50
960 倍 (表 2)。 结果表明，通过注射途径免疫，PBS 组死亡率

为 86.67%(13/15)； ΔcrRNA 组 死 亡 率 为 0(0/15)，

表 2 无乳链球菌不同菌株对尼罗罗非鱼的 LD 5 测定
0
RPS 为 100%； ΔcpsE 组 死 亡 率 为 26.67%(4/15)，
Tab. 2 LD 50 determination of different S. agalactiae
RPS 为 69.23%(图 2-a)。通过浸泡途径免疫，PBS
strains in O. niloticus
组死亡率为 93.33%(14/15)；ΔcrRNA 组死亡率为
攻毒剂量/(CFU/尾) 死亡数/尾 number of death 20.00%(3/15)， RPS 为 78.57%； ΔcpsE 组 死 亡 率
challenge dose WT ΔcpsE ΔcrRNA
为 53.33%(8/15)，RPS 为 42.86%(图 2-b)。从结果
1×10 9 30/30 13/30 30/30
可知，无论是通过浸泡方式还是注射方式，免疫
1×10 8 30/30/ 3/30 15/30
ΔcrRNA 获得的保护力均高于 ΔcpsE；两种免疫方
1×10 7 24/30 0/30 3/30
式比较，腹腔注射效果更好。
1×10 6 15/30 0/30 0/30
1×10 5 3/30 0/30 0/30 2.6 弱毒株 ΔcrRNA 和 ΔcpsE 诱导的免疫相关
1×10 4 0/30 0/30 0/30 基因表达
PBS 0/30 0/30 0/30
RT-qPCR 结果显示，免疫接种后尼罗罗非鱼
1.04×10 6 >1.00×10 9 1.36×10 8
各免疫相关基因 (MHC Ⅱβ、CD4-1、IFN-γ 和 IgM)
LD 50

的表达水平呈现先上调后回落的趋势 (图 3)。免疫
2.4 弱毒株 ΔcrRNA 和 ΔcpsE 安全性评价 后第 3 天，免疫组的 MHC Ⅱβ、CD4-1 和 IFN-γ
病理组织学观察显示，相较于 PBS 对照组， 表达水平均达到高峰，此后随着时间的延长而回
感染野生株后，尼罗罗非鱼的脾脏组织出现严重 落 (图 3-a~c)。IgM 的表达水平达到高峰的时间则
出血，并出现坏死灶；脑组织的脑膜部位则出现 有所不同，ΔcrRNA 组为第 14 天，ΔcpsE 组为第 7
炎性细胞浸润，皮层部分也出现充血，实质血管 天，之后均随时间回落 (图 3-d)。相比对照组，免
周 “袖 套 样 ”炎 性 细 胞 浸 润 。 而 感 染 ΔcrRNA 和 疫后第 1 天，2 个弱毒株免疫组上述免疫相关基
ΔcpsE 后，尼罗罗非鱼脑组织的脑膜光滑，无明 因表达水平未发生明显改变 (P>0.05)；从免疫后
显的炎性细胞浸润，脾脏组织也没有发生明显的 第 3 天起，ΔcrRNA 组诱导的免疫相关基因表达
病理损伤 (图版Ⅱ)，说明 ΔcrRNA 和 ΔcpsE 接种 水平均显著高于对照组 (P<0.05)，并维持至第 28
天；而 ΔcpsE 组诱导的免疫相关基因表达水平仅
尼罗罗非鱼安全性比较好。
在第 3 天全部显著高于对照组 (P<0.001)，且第 28
2.5 弱毒株 ΔcrRNA 和 ΔcpsE 的免疫保护力
天回落至基线水平。2 个弱毒株免疫组相比，在
分别通过注射免疫和浸泡免疫的方式评估了 免疫后第 3 天，ΔcpsE 组诱导的 MHC Ⅱβ(图 3-a)

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