Page 101 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 王笑然，等：慢性热应激诱导大口黑鲈肝脏线粒体功能障碍及糖脂异常沉积 50 卷

格参照试剂盒说明书进行；肝体比 (HSI, %)计算 立，日本) 成像系统观察线粒体形态并拍照。照片
公式： 保存后，在相同倍数视野下用 ImageJ 软件统计该
HSI = 肝脏重/体重 × 100% 视野内所有形态完整的线粒体数量。
1.4 肝脏油红及糖原染色 1.6 肝脏基因荧光定量分析

每组取 2 个肝脏样，肝脏经 4% 多聚甲醛固 使用 TransZol Up 试剂盒 (北京全式金生物技
定后，用乙醇梯度溶液逐级脱水后石蜡包埋，随 术有限公司，北京) 提取大口黑鲈肝脏组织总
后切成 5 μm 薄片进行油红 O 染色和 PAS 染色，
RNA，并用琼脂糖凝胶电泳及 NanoDrop 微量分
随后用苏木素复染，返蓝后用甘油明胶封片。切
光 光 度 计 检 测 RNA 质 量 及 浓 度 。 将 高 质 量 的
片制作完成后，用显微镜观察并拍照。
RNA 逆 转 录 为 cDNA， 随 后 用 SYBR Green Pro
1.5 肝脏线粒体观察 Taq HS 试剂盒 (艾克瑞生物工程有限公司，湖南)
每组取 2 个肝脏样，肝脏经 2.5% 戊二醛浸 对目的基因表达进行定量分析。样本分析时每组
泡后用 2% 四氧化锇固定，用乙醇梯度溶液逐级 测 8 个样本，重复 4 次。本研究以 Ef1α 为内参基
脱水后将肝组织用 Epon 812 树脂浸润并聚合，随 因，基于 2 −∆∆C t 法对目的基因进行定量 (表 1)。所
后切割成 70~90 nm 超薄切片，用乙酸铀酰和柠檬 有引物委托上海生工生物股份有限公司合成，引
酸铅进行双重染色。最后，用 HT7600 显微镜 (日 物扩增效率范围为 86%~128%。

表 1 本研究所用引物序列
Tab. 1 Primer sequence used in this trial
基因 上游引物 下游引物 登录号/来源
gene forward sequence (5′–3′) reverse sequence (5′–3′) accession no./source
IRA CTTCGTCTACAGCCAGGCATCG TTTGGCCACACCGACCTCACC >XM_038710731.1
IRB CGGCACAGAAATCCCAGAGC CAGCAGGCTCACAAAATAAACATCT [26]
IRS1 TAGTGGTGGTGTCAGCGGT GGAGGTGGAAGTAAAGGAT [26]
ADPGK AAGCTGTCCCTAAACCCA AGCCCTACTGTCCGAAGT [26]
PFKL CTGGCTGAGCTCGTAAAG GTGCCGCAGAAGTCGTTG [26]
PK CTCTTTCATCCGCAAAGC AATTCCCAGGTCACCACG [26]
GSK3β TTCATTTACTGGCATCCTTTT ATCCCCTTTGATTCTCTCTCG [26]
PEPCK GGAAACGGCCAACATTCT GCCAACCAGCAGTTCTCAT [26]
AKT1 CTTAATTTACCGCCGAAAC CCTCCTTGACAATCACCAC >XM_038729217.1
PBP1 GCGATTGGCGAATTTATC ACTCTGTGACGGCGGGTT >XM_038704229.1
PGC-1α TTGAATGTAAGGACTCAGCC AGTTCTGCTCTGATTTCCTG [27]
BNIP3 AGGTTTGGGGGAGGGTTG AGAAGGGGGGTCTGTGCT [27]
AMPKα CTACCCCTCTCCGCTCTG GATGGTGTGGCTTCCTGG [27]
SIRT1 CAGCGGATTATTCAGTGCCA GATGTCTTCCCTTACAGCCTCA [27]
ORAI1 CTGTCCTCCGGTGTGAGTTT TGTGGTTTTTAGCGGCGGAT >XM_038715691.1
MFN1 TGGTGGCCAACTCTGAATCC GTGCCTTATCGCGGTCTACA >XM_038715801.1
DRP1 AAGAGAATGGCATCGACGGG TTGGTAATGCCGGGAAGGTC >XM_038705810.1
FIS1 CTACCTTGCTGTGGCCAACTA CTTTGACACAGCCAAACCGA >XM 038732370.1
ERRA TCGAGGACATGGAGGCTGTA CCACCACGGGTCTTAATGCT >XM_038709551.1
LC3 CGCCTCCAGCTAAACTCCAA TCATACACCTCGCAGATGGC >XM_038705174.1
P62 CATGACGGACAGAGGACCAA AGTCTCTGCACACCTTTGACC >XM_038698592.1
TFAM GAGGCCAGAGGAACCACTAC ATGTGCTCCTCCCAGGACTT >XM 038735968.1
ACC ATCCCTCTTTGCCACTGTTG GAGGTGATGTTGCTCGCATA >XM_038709734.1

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