Page 100 - 《水产学报》2026年第3期

3 期 水 产 学 报 50 卷

中 。据报道，盛夏时期我国华南及西南地区养 1 材料与方法
[5]
殖池塘水温可长期超过 33 ℃ ，8 月中旬上层水
[6]
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温甚至可超过 40 ℃ 。鱼类对温度耐受能力有限， 1.1 实验鱼及养殖管理
水温异常升高已远超当地主要养殖鱼类生长适温
本研究获得了佛山大学实验动物管理和使用
区，包括尼罗罗非鱼 (Oreochromis niloticus，适温 22~ 伦理委员会批准 (审批号：778468)，实验人员全
28 ℃)，黄颡鱼 (Pelteobagrus fulvidraco，适温 26~ 程严格遵守相应伦理规范，各项实验工作开展均
29 ℃) ，大口黑鲈 (Micropterus salmoides，适温 恪守该委员会制定的规章制度。大口黑鲈幼鱼 (5
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26~29 ℃) 及鳜 (Siniperca chuatsi，适温 24~30 ℃) [10] 月龄) 采购于佛山梁氏水产种业有限公司，在佛山
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等重要经济品种。鱼类是典型的变温脊椎动物， 大学水产研究基地暂养 2 周后，将 240 尾均重
水温升高造成的鱼类生理或行为变化被定义为热 (12.40±0.15) g 无病无伤个体随机分配于 8 个容积
应激。热应激可区分为急性及慢性热应激，急性 为 360 L 的室内养殖桶中，每桶 30 尾。所有养殖
热应激通常由温度在短时间内急剧上升引起，慢 桶均安置在 27 ℃ 恒温房，其中 4 个桶加装恒温
性热应激则由夏秋季持续高温造成 。慢性热应 加热棒并以每天升温 1 ℃ 的方式将箱内水温升高
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激 (CHS) 持续时间长，是水产养殖业安全生产的 至 33 ℃ 。养殖实验持续 8 周，每天于 08:00 及
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巨大隐患，现已引起学术界及养殖一线的广泛关 17:30 用商品料 (47.50% 粗蛋白，10.20% 粗脂肪；
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注 。鱼类慢性热应激的病理特征包括肉质下降、 广东杰大饲料有限公司) 分别饱食投喂大口黑鲈
代谢紊乱、免疫抑制和组织损伤 [11-14] ，因而鱼类 1 次。养殖期间持续增氧，每日虹吸底部污水并
在持续高温气候时通常生长缓慢且病害频发 [15-16] 。 以 20 L/min 流速更换箱内 1/3 水，保持养殖水体
水温升高引起养殖鱼类大规模死亡的事件已多见 氨氮<0.1 mg/L、溶解氧>5 mg/L。换水前预先将备
报道，严重制约了水产养殖业的经济效益与可持 用水曝气，并将其温度调整至箱内相应水温。
续发展 [17-19] 。因此，亟需寻求缓解鱼类慢性热应
1.2 采样方法
激组织损伤及免疫力下降的可行策略。
养殖实验结束后禁食 1 天，取样前用 0.1 mg/L
大口黑鲈因生长快且肉质鲜美而在我国广泛
丁香酚将实验鱼麻醉。每个养殖桶内随机选取
[20]
养殖，2023 年我国大口黑鲈产量已超 80 万 t 。
6 尾鱼称重，随后于无菌台上解剖取其肝脏并称
目前，大口黑鲈养殖业正遭受日益严峻高温气候
重，用于计算实验鱼肝体比。每桶随机取 2 条实
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的威胁 。肝脏是鱼类重要免疫和代谢器官，对
验鱼肝脏，每条鱼取 2 份肝脏样品，每样约取
环境变化尤为敏感，被认为是鱼类热应激的首要
0.2~0.4 g，用 2 mL 冻存管−80 ℃ 保存，用于后续
[12]
靶器官 。能量正常供应时，肝脏可通过合成热
肝脏转录组学测序、生化指标测定及基因定量分
休克蛋白及抗氧化酶等途径快速响应热应激诱发
析；每桶随机取 1 份肝脏，用手术刀将其切成约
的氧化损伤及功能障碍，进而维持细胞正常功
0.5 cm 小块，用 4% 多聚甲醛溶液固定，4 ℃ 保
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能 [22-23] ，然而高温对糖脂代谢的干扰常导致鱼类能
存用于制备肝脏组织石蜡块及后续油红 O 及糖原
量代谢失衡，并由此引发级联损伤 。线粒体是
[14]
(PAS) 染色观察；每桶随机取 1 份肝脏，用手术
糖脂代谢及能量产生的核心细胞器，也是细胞响
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刀将其切成约 0.1 cm 小块，用 2.5% 戊二醛溶液
应环境应激的核心枢纽，其功能稳态对鱼类在慢
固定，4 ℃ 保存用于透射电子显微镜 (TEM) 观察。
性应激状态下维持能量平衡及健康至关重要 [24-25] 。
取样后剩余的肝脏分组收集，每组各收集 5 个混
因而，改善线粒体功能及能量代谢可作为缓解鱼
合肝脏样品，−20 ℃ 保存用于粗脂肪含量测定。
类肝脏慢性热应激损伤的潜在策略，但需先揭示
慢性热应激对大口黑鲈肝脏能量代谢及线粒体稳 1.3 肝脏参数、粗脂肪、甘油三酯及总胆固醇
态的调节机制。本研究首次基于“线粒体稳态-代 含量检测
谢-免疫轴”视角，系统探讨了 CHS 对大口黑鲈肝 肝 脏 粗 脂 肪 含 量 用 索 氏 提 取 法 按 AOAC
脏线粒体功能、糖脂代谢、炎症反应及转录组的 (2005) 标准进行测定，肝脏甘油三酯 (TG，A110-1-1)
影响，研究结果可为全球气候变暖背景下大口黑 及总胆固醇 (T-CHO, A111-1-1) 含量采用商业试剂
鲈养殖业应对高温挑战提供理论依据。 盒测定 (南京建成生物工程研究所)，测试过程严
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