Page 241 - 《水产学报》2026年第2期
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2 期             谭美星,等:黄鳝致病菌豚鼠气单胞菌分离鉴定、药敏特性及其生物学分析                                        50 卷


                                                           牡蛎气单胞菌  A. crassostreae (NR_179578.1)
                                                         57 蛇形气单胞菌  A. encheleia (NR_041962.1)
                                                         43  隐蔽气单胞菌  A. tecta (NR_114868.1)
                                                         65  杀鲑气单胞菌亚种  A. salmonicida subsp (NR_037011.1)
                                                         27  波波夫气单胞菌  A. popoffii (NR_025317.1)
                         M      1      2
                                                        53  嗜水气单胞菌  A. hydrophila (NR_113342.1)
                                                        100  嗜水气单胞菌  A. hydrophila (NR_119039.1)
                                                       50
                   bp                                          阴沟气单胞菌  A. cavernicola (NR_132718.1)
                                                        58  Ac240602
                                                     100  99  豚鼠气单胞菌  A. caviae (NR_104824.1)
                                                            舒氏气单胞菌  A. schubertii (NR_119043.1)
                   2 000                         100     100  差异气单胞菌  A. diversa (NR_117303.1)
                                                          99  差异气单胞菌  A. diversa (NR_118864.1)
                   1 000                                       解果胶假气单胞菌  Acinetobacter pectinolyticus (NR_156860.1)
                   750                                        牡蛎大洋球形菌  Oceanisphaera ostreae (NR_109099.1)
                                                               海岸佐贝尔氏菌  Zobellella maritima (NR_179853.1)
                   500                            100       黄海海洋单胞菌  Oceanimonas marisflavi (NR_179852.1)
                                                    52
                                                       100  杜氏海洋单胞菌  Oceanimonas doudoroffii (NR_114475.1)
                   250                                    100 杜氏海洋单胞菌  Oceanimonas doudoroffii (NR_112061.1)
                                                           副铁单胞菌  Paraferrimonas haliotis (NR_159241.1)
                                                               亚海洋希瓦氏菌  Shewanella submarina (NR_179012.1)
                                             99
                   100                              100       气腹希瓦氏菌  Shewanella pneumatophori (NR_041292.1)
                                            0.01         100   真信希瓦氏菌  Shewanella fidelis (NR_025195.1)
                               (a)                                         (b)
                                                  图 2    16S rRNA  分析结果
              (a) 16S rRNA  扩增片段,M. marker,1. 阴性对照,2. 16S rRNA;(b) 分离菌株  Ac240602,16S rRNA  基因序列系统进化树。
                                       Fig. 2 The results of 16S rRNA gene sequence analysis
              (a) 16S rRNA amplified fragment, M. marker, 1. control, 2. 16S rRNA; (b) phylogenetic tree of 16S rRNA gene sequence of isolated strain Ac240602.

                                                  表 4    ST2615  型相关信息
                                               Tab. 4    ST2615 related information
                 分离菌株         地区       时间          溯源                             MLST
                  isolates   region    time  trace back to the source  gyrB  groL  gltA  metG  ppsA  recA  ST
                Aer_28.fasta  巴西 Brazil  2008   人 H. sapiens   1 139  624   1 140  308   179   1 067  2615
                Aer_27     巴西 Brazil   2008     人 H. sapiens   1 139  624   1 140  308   179   1 067  2615

                                                               基因,分别为       lip、alt、act、gcaT、ompA、ahp、

                                         3042     2835
                                                               aer 和  hly (图  4)。
                                     3297
                                                                    溶血活性  分离菌株           Ac240602  的菌落在
                                          1279
                                                               血琼脂平板上出现淡绿色的溶血圈                (图  5),呈现典
                                                               型的  β  溶血活性,表明分离菌株           Ac240602  具有  β
                                                2115           溶血活性。
                                          2615
                                                                    人工感染实验  分离菌株              Ac240602  人工
                                                               感染黄鳝后,其呈现全身出血状态,头部、嘴部、
                                                               肛门红肿出血      (图版 Ⅱ-1,2),对照组黄鳝未出现
                                                                                        11
                                                               异常情况。最高浓度组           (2×10  CFU/mL) 黄鳝在攻
                                                               毒  8 h  后陆续出现死亡,感染         12 h  后死亡  12  尾,
                                                                                             9
                                                               24 h  后全部死亡;低浓度组         (2×10  CFU/mL) 黄鳝
                                                               未出现死亡情况,其余实验组出现不同程度死亡。
                            图 3    MLST  分析图                   死亡黄鳝剖检可见肝脏、肠、脾脏、肾脏均有不
              小圈为  ST 2615  所在区域图,大圈为区域放大图。
                                                               同程度出血      (图版 Ⅱ-3~6),攻毒组黄鳝呈现出与
                         Fig. 3 MLST Analysis Chart
                                                               自然感染病例类似的临床症状。
              The small circle is the region map of ST 2615, and the large circle is the
                                                                   攻毒组黄鳝的肝脏、脾脏、肾脏、肠、心
              region enlarged map.
                                                               脏 、 鳃 、 脑 、 肌 肉 、 血 均 能 检 测 到 分 离 菌 株
              12  种毒力基因进行检测分析,PCR            检测结果显示,           Ac240602 (图  6-a),菌载量分别为      4.23×10 、6.34×
                                                                                                   8
              在  12  种毒力基因中分离菌株携带其中的               8  种毒力      10 、2.37×10 、4.12×10 、1.50×10 、2.18×10 、1.62×
                                                                                           7
                                                                                                    8
                                                                 8
                                                                         8
                                                                                  8
              中国水产学会主办  sponsored by China Society of Fisheries                          https://www.china-fishery.cn
                                                            7
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