Page 236 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 水 产 学 报 50 卷

黄鳝 (Monopterus albus) 又称为鳝鱼、罗鳝、 1 材料与方法
血鳝、蛇鱼，隶属于合鳃鱼目 (Synbranchiformes)
合鳃鱼科 (Synbranchidae)，其肉味鲜美、富含丰 1.1 实验材料
富的 DHA、EPA ，具有延缓衰老、降低血脂等
[1]
患病黄鳝由湖北省荆州市某黄鳝养殖基地提
药用价值和经济价值 [2-3] 。据 2024 年渔业年鉴统计，
供，病鳝出现摄食量下降、体表出血等临床症状，
2023 年黄鳝养殖产量高达 35 万 t，相较 2022 年，
且大量死亡；剖检可见肠、肝脏等器官明显出血。
同比增长了 6.28%。随着黄鳝需求量越来越大，
实验用黄鳝购自湖北荆州长江大学实验动物中心，
人工养殖的规模和密度不断增加，以及外界环境
选取健康黄鳝 90 尾，体长 20~25 cm，暂养观察 7 d
的不断变化，黄鳝易受细菌、病毒、寄生虫和真
后进行检测，选取不携带特定病毒和细菌的健康
菌感染 。细菌感染引起的疾病给黄鳝养殖带来
[4]
黄鳝用于人工感染实验。本研究获得了长江大学
巨大损失，黄鳝常见的细菌性疾病主要有出血性
实验动物管理和使用伦理委员会批准，实验过程
败血症、烂尾病、肠炎、溃烂病等 ，如嗜水气
[5]
中操作人员严格遵守长江大学伦理规范，并按照
单胞菌 (Aeromonas hydrophila) 可引起黄鳝出血性
长江大学伦理委员会制定的规章制度执行。
败血症 [6-10] ，温和气单胞菌 (A. sobria)引起体表溃
LB 培养基、胰酪胨大豆羊血琼脂平板和细
烂 、 白 头 、 出 血 等 症 状 [11-13] ， 荧 光 极 毛 杆 菌
菌生化微量鉴定管 (青岛海博生物技术有限公司)；
(Pseudomonas fluorescence) 易引起腐皮病 ，产碱
[14]
革兰氏染色试剂盒 (北京索莱宝科技有限公司)；
假单胞菌 (P. alcaligenes) 引起烂尾病 ，迟缓爱德
[15]
药物敏感纸片 (杭州微生物试剂有限公司)；Taq
华氏菌 (Edwardsiella tarda) [16] 引起的细菌性出血
酶 (北京聚合美生物科技有限公司)；实验引物由
病，维氏气单胞菌 (A. veronii) [17] 引起的病鳝全身
生工生物工程 (上海) 股份有限公司合成。
出血等症状，目前尚无豚鼠气单胞菌 (A. caviae)
感染黄鳝的相关报道。 1.2 病原检测
豚鼠气单胞菌是隶属气单胞菌科 (Aeromon- 无菌条件下检测患病黄鳝体表症状；取黄鳝
adaceae) 气单胞菌属的革兰氏阴性菌，该菌是一 病变组织至 2.0 mL 的离心管中，加入 1 mL无菌
种常见的人-兽-鱼共患致病菌 ，分布在各种水生 水进行研磨，取 100 μL 研磨液加入 LB 液体培养
[18]
[19]
环境中 ，如淡水、海水、河水和污水中 [20-21] ，易 基中进行增菌，28 ℃ 培养 24 h；合成黄鳝常见病
导致免疫力低下的宿主出现感染和多种并发症 。 原的特异性引物 (表 1)，以提取的细菌 DNA 作为
[22]
在 目 前 报 道 中 ， 豚 鼠 气 单 胞 菌 主 要 以 感 染 人 模板进行 PCR 反应。总反应体系 (20 μL) 含 10 μL
(Homo sapiens) 和鱼为主，人感染豚鼠气单胞菌会
Taq 酶 、 7 μL 纯 净 水 、 上 下 游 引 物 各 0.5 μL，
造成坏死性筋膜炎 [23-24] 、角膜炎 、败血症 、脓
[25]
[26]
加入 2 μL DNA 模板；反应程序：95 ℃ 预变性
毒症 、结肠溃疡 [27] 等多种疾病。豚鼠气单胞菌
[26]
5 min，95 ℃ 30 s、56 ℃ 30 s、72 ℃ 45 s、38 个
可感染尼罗罗非鱼 (Oreochromis niloticus) [28-29] 、鲇
循环，72 ℃ 退火 10 min，4 ℃ 保存。PCR 扩增产
[30]
鱼 (Clarias spp.) 、蟾胡鲇 (C. batrachus) 、大口
[31]
物 120 V 进行凝胶电泳，分析目标条带的扩增情况。
[32]
黑鲈 (Micropterus salmoides) 、罗氏沼虾 (Macro-
[33]
brachium rosenbergii) 、 鲢 (Hypophthalmichthys 1.3 病原菌的分离与纯化
molitrix) 、草鱼 (Ctenopharyngodon idella) 、大 用接种环蘸取 PCR 检测为阳性的病料，在
[35]
[34]
口 鲇 (Silurus meridionalis) 、 中 华 绒 螯 蟹 LB 琼 脂 培 养 板 上 进 行 连 续 划 线 ， 28 ℃ 培 养
[36]
(Eriocheir sinensis) [37] 等多种水生动物，造成体表 18~24 h；挑取优势菌落进行纯化培养，观察并记
褪色、内脏器官出血、黑斑、肢体残损等症状。 录菌落生长情况。
本研究从体表和内脏出血明显的黄鳝病灶组织中
1.4 病原菌形态学观察
分离到 1 株优势菌，并对其进行分离鉴定、16S rRNA
测序、多位点序列分型 (MLST)、致病性和耐药性 取分离菌株的纯培养物接种于 LB 琼脂培养
等生物学特性分析。本研究结果以期为黄鳝源豚 板，28 ℃ 培养 24 h，观察菌落的形态、大小、颜
鼠气单胞菌的预防和临床诊治提供数据支撑，为 色等；使用革兰氏染色试剂盒对分离菌株进行染
黄鳝细菌性疾病的诊断和精准治疗提供参考。 色并在光学显微镜下观察；分离菌株的纯培养物
https://www.china-fishery.cn 中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries
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