Page 239 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 谭美星，等：黄鳝致病菌豚鼠气单胞菌分离鉴定、药敏特性及其生物学分析 50 卷

物敏感性，取分离菌株处于对数生长期的菌液均 离菌株为 ESBLs 阳性。将美罗培南、美罗培南/
匀涂布在 LB 琼脂培养板上，将 29 种抗生素药片 EDTA 药敏片均匀贴在 LB 琼脂培养板，若美罗培
放置在培养板上，28 ℃ 恒温培养 18~24 h，测量 南/EDTA 抑菌圈直径大于美罗培南 5 mm 时，则
并记录抑菌圈直径；根据抗菌药物药敏纸片试剂 分离菌株为 MBLs 阳性。
盒说明书的判定标准，分析分离菌株对不同抗菌 中药敏感性实验 选取鸡血藤、连翘、地
药物的敏感性。 榆、蒲公英、五味子、半支莲、川贝母、艾叶、
耐药基因的检测 参照已有文献 [38] 合成 苦棟树皮、黄连、乌梅子、黄芩、苏木、柯子、
抗生素耐药基因的引物：Beta-lactams 的 blaTEM、 赤芍、五倍子、丹参、丁香、鱼腥草和金银花 20 种
blaQXA、 blaCTX、 blaSHV、 blaIMP、 blaDHA 基 中药材，分别称取 2 g 加入 40 mL 无菌水浸泡 1 h
因，Aminoglycosides 的 aadA1、aadA2、strA、strB、 后煎煮，隔水加热，沸腾后转文火继续煎煮 2 h，
aadB、 aacC 基 因 ， Tetracyclines 的 Aph(3')-Ia、 过滤后的药液加入 40 mL 无菌水进行 2 次煎煮，
tetA、tetbB、tetD 基因，Quinolones 的 gurA、parC、 将药液浓缩至 3 mL，空白药敏片在药液中浸泡后
dhfrV、 dhfrVII、 dhfrVⅩⅡ、 dhfrVⅩIII， Sulfon- 烘干。取药敏片贴在涂布了分离菌株的培养板上，
amides 的 sul I、sul II，Class 1 in-tegron 的 3'CSint1、 28 ℃ 恒温培养 16~18 h，测量并记录每种中药的
VR 基 因 ， 通 过 PCR 的 方 法 筛 查 分 离 菌 株 抑菌圈直径。
Ac240602 携带的耐药基因。
2 结果
双药敏协同实验 采用双药敏片协同实验
分析分离菌株是否为超广谱 β-内酰胺酶 (ESBLs)
2.1 病原检测结果
和金属-β-内酰胺酶 (MBLs) 的阳性菌株。取分离
菌株的纯培养物涂抹在 LB 琼脂培养板上，将头 PCR 检测结果显示，黄鳝弹状病毒、嗜水气
孢他啶、头孢他啶/克拉维酸，头孢噻肟、头孢噻 单胞菌、温和气单胞菌、类产碱假单胞菌、迟缓
肟/克拉维酸的药敏片均匀贴在 LB 琼脂培养板， 爱德华氏菌、无乳链球菌、维氏气单胞菌均未出
28 ℃ 恒温培养 16~18 h，各设置 3 个重复；若头 现特异性扩增，豚鼠气单胞菌扩增出大小约为
孢他啶或头孢噻肟任何一种与克拉维酸联用时比 206 bp 的特异性条带 (图 1)，表明患病黄鳝疑似感
单独使用时的抑菌圈直径增加 5 mm，则判定该分 染豚鼠气单胞菌。

M 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16
bp

2 000
1 000
750
500
250
100

图 1 黄鳝常见病害检测结果
M. marker，1，3，5，7，9，11，13，15. 阴性对照，2. 嗜水气单胞菌，4. 温和气单胞菌，6. 类产碱假单胞菌，8. 迟缓爱德华氏菌，10. 豚
鼠气单胞菌，12. 无乳链球菌，14. 维氏气单胞菌，16. 黄鳝弹状病毒。
Fig. 1 Detection results of common diseases of M. albus
M. marker, 1, 3, 5, 7, 9, 11, 13, 15. negative control, 2. A. hydrophila, 4. A. sobria, 6. P. alcaligenes, 8. E. tarda, 10. A. caviae, 12. S. agalactiae, 14. A.
veronii, 16. CrERV.

2.2 病原菌的分离与鉴定 扫描电镜下，分离菌株为短杆状，无侧向鞭毛

分离菌株在 LB 琼脂培养板上生长出圆形、 (图版Ⅰ-3)。
浅黄色、光滑菌落 (图版Ⅰ-1)；革兰氏染色后， 生理生化鉴定结果显示，分离菌株能发酵蔗
在显微镜下观察可见单个分散排列的红色杆菌 糖、麦芽糖、甘露醇、葡萄糖、海藻糖、3 % 过氧
(图版Ⅰ-2)，表明分离菌株为革兰氏阴性杆菌。在 化氢酶试剂、七叶苷、果糖、半乳糖、阿拉伯糖、

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