Page 230 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 刘威彤，等：传染性胰脏坏死病毒 (IPNV) 检测及区分 1、5 基因型方法的建立及应用 50 卷

2.6 样本检测及基因分型 表 4 30 份样本荧光定量 PCR 检测结果
为了评估本研究建立方法的准确性，对实验 Tab. 4 The results of fluorescence quantitative PCR
室保存的 30 份细胞培养样本进行检测及基因分型。 样本编号 C t 值1 C t 值2 平均值 检测结果 基因型
sample cycles 1 cycles 2 average detection genogroup
所有样本均通过 CHSE-214 细胞分离培养和 VP2 no. value result
基因 Sanger 测序预先验证其样本结果及基因型， 1 18.65 18.56 18.61 P 1
22 份为 IPNV 阳性，8 份为 IPNV 阴性，其中 3、 2 25.11 24.32 24.72 P 1
9 和 17 为 IPNV 5，其余为 IPNV 1。RT-qPCR 结 3 20.68 20.49 20.59 P 5
t
果显示，1~22 号阳性样本的平均 C 值为 14.75~ 4 24.42 24.57 24.50 P 1
24.72，C 值均≤35 且出现典型的扩增曲线，另 5 24.59 24.64 24.62 P 1
t
外 8 份阴性样本均显示出了阴性结果，无 C 值和 6 14.63 14.87 14.75 P 1
t
典型的扩增曲线 (表 4)。 7 20.98 21.1 21.04 P 1
8 17.23 16.49 16.86 P 1
PCR 分 型 结 果 显 示 ， 用 IPNV 5 检 测 引 物
9 21.94 20.99 21.47 P 5
PCR 扩增后，编号为 3、9 和 17 泳道出现特异性
10 21.74 21.71 21.73 P 1
条带，与预期的目标条带 543 bp 相对应 (图 6)；
11 22.91 22.40 22.66 P 1
用 IPNV 1 分型引物 PCR 扩增后，除编号为 3、9
12 21.74 21.72 21.73 P 1
和 17 泳道均出现特异性条带，与预期的目的条带
13 20.95 21.03 20.99 P 1
502 bp 相对应。对 22 株 IPNV 的 VP2 基因序列进行
14 21.13 20.59 20.86 P 1
系统发育分析，结果显示，这些毒株聚集为 2 个不
15 18.66 19.03 18.85 P 1
同的基因型，19 株 IPNV 1 聚为一簇，3 株 IPNV 5
16 20.01 19.71 19.86 P 1
聚为一簇，与 PCR 分型鉴定结果相一致(图 7)。对
17 21.52 21.40 21.46 P 5
30 份样本检测结果的符合率均为 100%，说明本
18 23.07 22.97 23.02 P 1
研究建立的检测及分型方法具有较高的准确性。
19 21.50 21.23 21.37 P 1
3 讨论 20 22.46 22.52 22.49 P 1
21 21.61 22.35 21.98 P 1
IPNV 能够通过垂直和水平传播的方式对宿 22 17.25 16.97 17.11 P 1
主鱼类进行感染，疾病暴发后，幸存的鱼可能会 23 - - - N -
成为病毒无症状携带者，终身携带病毒，对子代 24 - - - N -
和其他易感鱼类均造成极大的感染风险。目前， 25 - - - N -
根据 VP2/NS 连接区的核苷酸序列比较，水生 26 - - - N -
RNA 病 毒 被 分 为 7 个 基 因 型 ， 基 因 型 1~6 的 27 - - - N -
[9]
IPNV 核苷酸相似性最低为 81.2% ，基因型 7 主 28 - - - N -
要感染海洋鱼类，与基因型 1~6 的核苷酸序列差 29 - - - N -
[10]
异最大 。目前，1 型和 5 型 IPNV 被普遍报道， 30 - - - N -
于美国、加拿大、墨西哥、智利和西班牙等国家 注：P. IPNV阳性，N. IPNV阴性，1. 基因1型，5. 基因5型，-. 无C t
值或基因型。
分离鉴定到 IPNV 1，于土耳其、意大利、挪威、
Notes: P. IPNV positive, N. IPNV negative, 1. genogroup 1, 5.
芬兰、苏格兰和伊朗等国家分离鉴定到 IPNV 5， genogroup 5, -. no C t value or genogroup.
且近年这两种基因型 IPNV 分离株的数量还在不
断上升 [22–25] ，是目前威胁我国鲑鳟养殖场的主要 点，开发特异性强、灵敏度高、快速便捷的检测
毒株，均可导致田间鲑鳟幼鱼大量死亡 。上述 及区分 1、5 基因型的方法对该疾病的预防和控制
[16]
两种基因型 IPNV 毒株间核苷酸序列差异较大， 具有重要意义。
Tapid 等 [26] 发现虹鳟感染这两种基因型 IPNV 后表 我国 IPNV 检测的国家标准《鱼类检疫方法
现出不同的转录组图谱及不同的死亡率和病毒载 第一部分：传染性胰脏坏死病毒 (IPNV)》(GB/T
量 [27] 。因此，针对 IPNV 的基因型特征和传播特 15805.1—2008) 规定，将组织样本接种到虹鳟性

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