Page 191 - 《水产学报》2026年第2期
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2 期            熊舒婷，等：草鱼和赤眼鳟          ifi27l2a  基因分子特性、原核表达及抗病毒功能比较                       50 卷

              第  2  天基本铺满后进行蛋白孵育实验。12               孔板每        SMART  结 构 域 分 析 结 果 显 示 ， 草 鱼 和 赤 眼 鳟
              孔 分 别 加 入    6 μg   纯 化 后 的  GST  空 载 蛋 白 、      IFI27L2A  蛋白均包含一个保守的         IFI-6-16  结构域。
              ScIFI27L2A、CiIFI27L2A  重组蛋白。孵育        3 h  后，    其中  CiIFI27L2A  的结构域位于第       8~89  位氨基酸，
              加入   10 μL GCRV。继续置于培养箱培养，分别                     ScIFI27L2A  的结构域位于第      11~89  位氨基酸   (图  1-
              于  6、12、24、36   和  48 h  后收集定量实验样品。              c,d)。二者氨基酸序列比较分析显示，草鱼和赤眼
                                                               鳟  IFI27L2A  仅存在  4  个氨基酸的差异，分别为
               1.8    数据分析
                                                               第  11  位  (A/T)、第  14  位  (A/V)、第  30  位  (T/S) 和
                   荧光定量实验数据采用           2 −∆∆C t  法分析，使用
                                                               第  74  位  (I/F)(图  1-e)。
              GraphPad Prism 9  软件作图，并使用单因素或双因
                                                                   蛋 白 理 化 性 质 分 析 显 示 ， CiIFI27L2A      和
              素方差分析对数据进行差异显著性分析。
                                                               ScIFI27L2A  蛋白的相对分子质量分别约为             8.26  和
               2    结果                                         8.34 ku，理论等电点      (pI) 均为  5.27，蛋白不稳定
                                                               系数分别为      13.83  和  16.99 (不稳定系数＜40   表示
               2.1    ifi27l2a 基因的克隆与序列生物信息学预测                 蛋白稳定)，表明        IFI27L2A  蛋白具有较高的稳定
              分析                                               性。蛋白三维结构预测显示，CiIFI27L2A               包含   3
                                                               个  α  螺旋和  2  个  β  折叠，而  ScIFI27L2A  只有  3  个
                   实 验 利 用 预 设 计 的 引 物 扩 增       Ciifi27l2a、
                                                               α  螺旋  (图  2)。
              Scifi27l2a  的  CDS  区，成功获得二者的开放阅读
              框  (ORF) 序列。测序结果显示，草鱼和赤眼鳟                         2.2    IFI27L2a  多序列比对及系统进化树分析
              ifi27l2a  的  ORF  长度均为  288 bp (GenBank  登录号         对赤眼鳟、草鱼、加拿大底鳉               (Fundulus het-
              分别为     XM051915840.1  和  PQ663008.1)，通过生        eroclitus， XP035985307.1)、 黑 鲫     (Carassius
              物信息学分析结果显示，草鱼和赤眼鳟                   ifi27l2a  基  carassius， XP059421463.1)、 胖 头 鱥 (Pimephales
              因均编码     95  个氨基酸   (图  1-a,b)，其对应蛋白的分           promelas， XP039546292.1)、 团 头 鲂     (Megalo-
                                      S 和
                                                        S 。
              子式分别为      C 366 H 616 N O 109 4  C 371 H 618 N O 110 4  brama  amblycephala， XP048062015.1)、 红 鳍 鲌
                                 98
                                                   98













                                         (a)                                         (b)

                    CiIFI27L2A         IFI-6-16                ScIFI27L2A          IFI-6-16
                            1 8                       89 95            1  11                     89 95
                                         (c)                                         (d)
                    CiIFI27L2A                                                                      95
                    ScIFI27L2A                                                                      95
                                                            (e)
                                  图 1    Ciifi27l2a  和  Scifi27l2a  序列、结构域及氨基酸序列比较分析
              (a) Ciifi27l2a  的  ORF  及氨基酸序列，(b) Scifi27l2a  的  ORF  及氨基酸序列，起始密码子用方框标出，终止密码子用“*”表示，下划线标示信
              号肽，(c) Ciifi27l2a  结构域，(d) Scifi27l2a  结构域，(e) 草鱼  (上) 和赤眼鳟  (下)IFI27L2A  氨基酸序列比对。
                 Fig. 1 Comparative analysis of sequence, structural domain and amino acid sequence of Ciifi27l2a and Scifi27l2a
              The ORF and amino acid sequences of Ciifi27l2a (a), Scifi27l2a (b), the start codon is marked by a box, “*” represents the stop codon, the signal peptide
              was underlined, and the IFI-6-16 domain was marked with a shade; structure comparison of IFI27L2A from S. curriculus (c) and C. idella (d); (e) amino
              acid sequence alignment of IFI27L2A from S. curriculus (top) and C. idella (bottom).

              中国水产学会主办  sponsored by China Society of Fisheries                          https://www.china-fishery.cn
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