Page 190 - 《水产学报》2026年第2期

2 期 水 产 学 报 50 卷

表 1 本研究所用引物信息
Tab. 1 Detailed information of primers used in this study
引物名称 序列(5'→3') 用途
primer name sequence (5'→3') purpose
Ci/ScIFI27L2A-F CTAGCGTTTAAACTTAAGCTTATGGGTCTCTTGATGCTGATCG ORF克隆
Ci/ScIFI27L2A-R ACGTCGTATGGGTAGCGGCCGCAATAAGGATCCCCAAAACTGTGCC ORF克隆
Ci/ScIFI27L2A-F CCGCGTGGATCCCCGGAATTCATGGCTCCAGTTGTTCTGGC 原核表达
Ci/ScIFI27L2A-R CAGTCAGTCACGATGCGGCCGCTCAAATAAGGATCCCCAAAACTGTGCC 原核表达
Ci/Sc β-actin-F GCTATGTGGCTCTTGACTTCG qPCR
Ci/Sc β-actin-R GGGCACCTGAACCTCTCATT qPCR
Sc ifi27l2a-F TTCTTACGCTGCATCGCTAA qPCR
Sc ifi27l2a-R GCTGCCTGACCCACAAAT qPCR
Sc irf9-F ACGAATTGCTGCCCTTCTTG qPCR
Sc irf9-R TTTTGCAGGTTCCTGTGGTG qPCR
Sc isg15-F GTTGGCGAACTCAAGAGGCT qPCR
Sc isg15-R CTGAGTCCGAGTTCAGTCCG qPCR
Ci ifi27l2a-F TGGTTGCAGTTCTTCAAGCC qPCR
Ci ifi27l2a-R AAGGATCCCCAAAACTGTGC qPCR
Ci irf9-F TTTTCAAGGCTTGGGCAGAG qPCR
Ci irf9-R ACTTTTGTTGAGGGCACAGC qPCR
Ci isg15-F AGCAGCTCATTTCTCAGCAC qPCR
Ci isg15-R TGAGTGCAAACCGTAACTGC qPCR
Ci/Sc ifn-F AATGCTCTGCTTGCGAATGG qPCR
Ci/Sc ifn-R TGGAAATGACACCTTGGTACCC qPCR
vp7-F ACCACCAACTTTGATCACGCTGAG qPCR
vp7-R AGCGTGGGAGTCTTGAATGGTCTT qPCR
vp5-F AGGCTCACCATTCACTCCGTA qPCR
vp5-R CAGCTTCACAGACCGACGAG qPCR
vp2-F ATCAAGGATCCCATTCCGCCTTCA qPCR
vp2-R TTAGAGGATCGTGCCATTGAGGGT qPCR

号肽) 并经测序验证后，将其转入大肠杆菌 BL21 BeyoGold™ GST-tag Purification Resin 中 ， 4℃ 缓
原核表达感受态中，挑取单克隆至 1 mL 含氨苄青 慢摇动 60 min以结合上清液中带 GST 标签的重组
霉素的 LB 培养基中培养 6 ~8 h 后，按 1∶100 体 蛋白。结合后将裂解上清和 BeyoGold™ GST-tag
积比接种至新的含氨苄青霉素的 LB 培养基中， Purification Resin 的混合物加入亲和层析柱中，收
37 ℃ 扩大培养至菌液 OD 60 0 达到 0.4~0.6，加入 集流穿液用于后续检测，使用 0.5 mL 裂解缓冲液
IPTG 至终浓度为 1 mmol/L，16 ℃ 条件下 150 r/min 洗柱 7 次，最后用洗脱缓冲液 (已按 9∶1 体积比
低温诱导表达约 16 h。低温离心收集菌体沉淀， 加入了 10×GSH) 洗脱带 GST 标签的重组蛋白 4 次，
利用 GST 标签纯化试剂盒 (碧云天生物技术股份 每次 1 mL 分别收集到不同的离心管中。对洗脱后
有限公司) 纯化蛋白。按 50 mL 菌液离心所得菌 的纯化重组蛋白进行 SDS-PAGE 电泳，并用考马
体沉淀加入 2~5 mL 裂解液 (根据实际菌量适当调 斯亮蓝染色后分析蛋白纯化情况，随后使用 anti-
整) 振荡混匀，先后加入适量蛋白酶抑制剂和溶菌 GST 的一抗对纯化后的重组蛋白进行蛋白质免疫
酶 (终浓度为 1 mg/mL) 冰上静置 30 min后，超声 印迹法 (Western blot) 检测。利用 BCA 法测蛋白
破碎 25 min，每次超声 2 s，间隔 2 s 至菌液澄清， 浓度后备用。蛋白孵育前一晚将长势优的草鱼或
离心收集上清液。将上清加入 1 mL 平衡好的 赤眼鳟肾细胞用胰酶消化后接种于 12 孔板中，至

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