Page 47 - 《水产学报》2026年第01期
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1 期                   严孟芝，等：大口黑鲈         IL-12  表达分析及异构体组成形式鉴定                           50 卷


                              p35a-Flag  +  +  +   +                p35a-Flag  +  +  +  +
                            AGMM-Myc    +   −  −   −              AGMM-Myc  +  −   −  −
                              p40b-Myc  −   −  +   −                p40b-Myc  −  −  +  −
                              p40c-Myc  −   −  −   +                p40c-Myc  −  −  −  +
                                  ku                                  ku
                                  25                 IB: Flag         25                 IB: Flag
                           Input  15                           Input  15
                                  70                                  70
                                  55                 IB: Myc          55                 IB: Myc
                                  43                                  43
                                  35                                  35

                                  25                                  25
                                                     IB:Flag                             IB:Flag
                                  15                                  15
                                                               Output
                           Output  70                          IP: Myc  70
                                  55                 IB: Myc          55
                           IP: Flag                                                      IB: Myc
                                  43                                  43
                                  35                                  35
                                            (a)                                (b)
                              p40b-Myc   +   −   −                p35a-Flag  +   −  −
                              p40c-Myc   −   +   −                p40b-Myc  −    +  −
                              p35a-Flag  −   −   +                p40c-Myc  −    −  +
                                  Flag   +   +   −                    Myc   +    +  −
                                  ku                                  ku
                                  25                                  25
                           Input                    IB: Flag   Input                    IB: Flag
                                                                      15
                                  15
                                  70                                  70
                                  55                IB: Myc           55                IB: Myc
                                  43                                  43
                                  25                                  25
                           Output                   IB: Flag                            IB: Flag
                                                               Output
                           IP:Flag  15                                15
                                                               IP:Myc
                                  70                                  70
                                  55                IB: Myc           55                IB: Myc
                                  43                                  43
                                            (c)                                (d)
                                              图 7    大口黑鲈  IL-12  亚基互作验证
              (a) 耦联小鼠抗  Flag  抗体的磁珠进行免疫沉淀    (IP) 检测；(b) 耦联小鼠抗  Myc 抗体的磁珠进行免疫沉淀检测；使用兔抗进行          Western blot
              (IB) 检测。AGMM-Myc 为非互作的蛋白质，用作阴性对照；(c) Flag     阴性对照；(d) Myc 阴性对照。Input. 输入的总蛋白裂解液；Output. 免
              疫沉淀样。
                                    Fig. 7 Interaction detection of IL-12 subunits in M. salmoides
              (a) immunoprecipitation assay (IP) coupled with magnetic beads of M. musculus anti-Flag antibody. (b) magnetic beads coupled with M. musculus anti-
              Myc antibody for immunoprecipitation detection; Western blot (IB) was performed using the corresponding rabbit antibody. AGMM-Myc is a non-inter-
              acting protein, as a negative control. (c) Flag negative control; (d) Myc negative control. Input. total input lysate; Output. immunoprecipitated sample.

              种抗炎性细胞因子，能够限制先天性和适应性免                            头肾可能并非鰤鱼诺卡氏菌感染后的早期免疫应
              疫细胞的免疫激活。早期研究表明                  IL-10  能够抑      答部位。脾脏组织中          p35a  基因的上调表达与        p40
              制  IL-12p40  基因的表达   [38-40] ，近期研究显示    IL-10    表达变化呈现同步但略有滞后的趋势，这一现象
              通过靶向     IRF1  和IRF5  的活性及    DNA  结合能力，         可能与   p35  蛋白的表达需要       p40  蛋白的诱导作用
              抑 制   TLR4/TNF  诱 导 的  NF-κB  靶 基 因 如   TNF、     有关   [43] 。在脊椎动物   IL-12  家族基因的进化过程
              IL12B  。Dong等   [42]  研究表明，大口黑鲈      IL-10  在    中，基因组复制事件导致鱼类普遍存在                     p35  和
                    [41]
              鰤鱼诺卡氏菌感期间          (2~7 d) 表达持续上调，推测             p40  基因的旁系同源现象，如草鱼             [18] 、高体鰤  [16]
              IL-10  持续上调是导致大口黑鲈          IL-12p40  基因感染       等鱼类中均报道了         p35a、p35b  以及   p40a、p40b、
              后期持续下调的原因之一。关于                p35a  基因的表达        p40c 基因，这些基因通过蛋白融合表达后，能够
              特征，在头肾组织中未检测到其转录产物，推测                            刺激相应免疫细胞上调           IFN-γ 的表达。本研究发

              中国水产学会主办  sponsored by China Society of Fisheries                          https://www.china-fishery.cn
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