Page 48 - 《水产学报》2026年第01期
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1 期                                     水    产    学    报                                 50 卷


                        6                *     pcDNA3.1              4                *     pcDNA3.1
                                               pcDNA3.1-p40b-p35a
                                                                                            pcDNA-40b-35a
                     p 35a 基因相对表达量 relative expression level of p 35a  4 2  *  干扰素基因相对表达量 relative IFN-γ expression  3 2 1  *
                                               pcDNA3.1-p40c-p35a
                                                                                            pcDNA-40c-35a









                        0                                            0
                               不同处理组                                        不同处理组
                          different treatment groups                   different treatment groups
                                   (a)                                          (b)
                                 图 8    大口黑鲈体内过表达      IL-12  诱导脾脏  IFN-γ 基因的相对表达量
              显著性标记“*”表示    P<0.05 (vs. pcDNA3.1  对照组)。(a) 过表达效率检测  (针对共同区域  p35a)；(b) 脾脏  IFN-γ 基因的相对表达量。
                         Fig. 8 The relative expression levels of IFN-γ gene in the spleen of M. salmoides induced by
                                                  in vivo IL-12 overexpression
              The significance markers "*" indicate P<0.05 respectively (vs. pcDNA3.1 control group). (a) overexpression efficiency detection (targeting the common
              region p35a); (b) relative expression level of IFN-γ gene in the spleen.
              现，大口黑鲈基因组中存在                2  个  p35  基因，即      elus coioides)  [46]  的研究中，IL-12p35  中形成链间
              p35a  和  p35b，然而在诺卡氏菌感染后的大口黑鲈                    二硫键的半胱氨酸是保守的。然而，本研究发现
              转录谱中未检测到         p35b  基因的表达。在对大西洋               大口黑鲈    p35a 在形成链间二硫键的半胱氨酸位点
              鲑  (Salmo salar) 和虹鳟  (Oncorhynchus mykiss) IL-  未表现出保守性。Jones 等        [47]  的研究指出，对     p35
              12  基因家族成员      IL-23  的研究中曾报道，IL-23      的      亚基中定点突变使其与           p40  无法形成链间二硫键，
              α  亚基  p19b  发生基因假化，其假化与启动子突变、                   但不影响     IL-12p70  形成。类似的，本研究的           Co-
              编码区无义突变或错义突变以及外显子剪接位点                            IP  的结果表明，p35a 中形成链间二硫键位点不保
              的变化相关，且导致基因组成型表达水平以及病                            守对  p35a 与  p40b  和  p35a 与  p40c 的互作无影响。
              原 感 染 反 应 调 节 改 变     [44] 。 本 研 究 分 析 显 示 ，     有研究表明，p35       亚基自身二硫键的缺失会影响
              NCBI 数据库中      p35b  基因  CDS  序列有  8%  依赖预       IL-12p70  的分泌效率    [43] ，其二聚体结构的稳定性
              测，基于该序列设计的引物均未扩增成功。转录                            也受到影响，说明         IL-12  亚基自身结构的稳定对
              组数据显示      p35a、p40a/b/c 均有表达，p35b      无信       二聚体形成具有重要作用。在本研究中                  p35a 形成
              号，多组织样本        RT-PCR  验证也未克隆到        p35b  全    链内二硫键的半胱氨酸位点是保守的，该特征对
              长  cDNA，但尚不足以确认其假基因属性，后续                         形成大口黑鲈       IL-12p70  稳定二聚体结构提供了分
              将通过基因结构解析和           RACE  技术深入验证。               子基础。大口黑鲈         p40a 中与链间二硫键形成相关
                   X  射线衍射   (X-ray) 是实验解析原子级蛋白结               的半胱氨酸位点         C 184  与  p40b  中的  C 207  均与智人
              构的金标准，通过该方法已证明智人                  IL-12p70 (二    p40  亚基的  C 、小鼠    C 197  处于同一位置，意味着
                                                                          199
              聚体) 的形式由      p35  和  p40  亚基的链间二硫键链接，           该位点的半胱氨酸在不同物种之间是保守的。
              其  p35  亚基中  C 已被证明是与        p40  亚基形成链间             蛋白质-蛋白质结合面之间存在静电相互作用
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              二硫键的半胱氨酸位点            [45] ，小鼠  p35  亚基则位于       并且在同源二聚体与异源二聚体表现出不同静电
              C ，而在鱼类       IL-12 的研究中，尚未报道通过该                 势分布，异源二聚体结合的位点之间一般呈现出
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              方法解析鱼类       IL-12p70  原子级蛋白结构。在以往               互补的静电分布         [48-49] 。在本研究中，大口黑鲈
              的研究中常通过分析蛋白序列及预测结构的保守                            p35a 结合面以带正电的氨基酸残基为主，结合表
              性推测鱼类      IL-12  二硫键形成的位点。在牙鲆            [14] 、  面显示出较强的正电性。p40a、p40b、p40c 结合
              高体鰤(Seriola dumerili)  [16] 、斜带石斑鱼  (Epineph-    面以带负电的氨基酸残基为主，其结合表面呈现

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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