Page 93 - 《水产学报》2025年第11期
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李捷，等                                                                 水产学报, 2025, 49(11): 119608

              天上午    9:00  更换  1  次预热水、投喂微藻并观察                 前，首先对结果进行正态分布检验和方差齐性
              三角帆蚌基本生理状况。分别在第                    1、7、14、       检验。三因素方差分析用于评估摄食水平、温
              21  天收集来自每个平行的           3  只蚌进行生理生化             度和时间对酶活性的影响。使用                 Tukey  氏事后
              指标测量。                                            检验进行多重比较，确定处理组之间和各因素
                                                               间的差异显著性         (P<0.05)。主成分分析        (PCA)
               1.3    样品制备
                                                               由  XLSTAT 2020  软件进行参数比较。
                                                                         ®
                   在冰上将蚌的肝脏和肠道组织取出，于液
              氮中迅速冷冻，在−80℃            下储存。组织在          4 ℃      2    结果
              盐水中以      1∶10 (质量体积比) 的比例匀浆，并
              在  4 ℃  下以  8 000×g  离心  10 min，提取上清液             2.1    三因素方差分析
              在  24 h  内用于酶活性测定。使用商业检测试剂                           三因素方差分析结果表明，温度、摄食水
              盒  (南京建成生物工程研究所)，根据试剂盒说                          平和时间之间对三角帆蚌的消化酶活性和代谢
              明书，测定肝脏和肠道组织中淀粉酶、脂肪酶                             酶活性均有显著影响           (P<0.05) (表  1，表  2)。除
              和纤维素酶等消化酶活性，测定肝脏组织中谷                             肠道中淀粉酶不受温度和时间的影响，以及脂
              丙转氨酶、谷草转氨酶、丙酮酸激酶和己糖激                             肪酶不受摄食水平和时间联合影响以外，其余
                             [14]
              酶等代谢酶活性 。                                        处理组中淀粉酶、脂肪酶、纤维素酶、谷丙转
               1.4    基因相对表达量测定                                氨酶、谷草转氨酶、丙酮酸激酶和己糖激酶活
                                                               性均受温度、摄食水平和时间组合的显著影响
                   为研究摄食和温度对三角帆蚌肝脏代谢分
                                                               (P<0.05)。在为期     21 d  的实验过程中，未出现
              子 机 制 的 影 响 ， 用     RT-qPCR  分 析 了   CPT1  和
                                                               蚌的死亡或异常生理状况。
              LDLR  的表达水平。使用           RNAiso-Plus (北京宝
              日医生物技术有限公司) 从              50 mg  肝脏中提取           2.2    消化酶活性
                                   ®
              总  RNA， 使 用     Hifair Ⅲ 1st Strand  cDNA   Syn-     在实验期间，除         23℃  中摄食处理组的淀粉
              thesis SuperMix for PCR (上海翊圣生物科技有限              酶活性保持稳定以外，其余处理组中大多呈持
              公司) 试剂盒进行逆转录。采用               Hieff UNICON  ®    续下降趋势      (图  1)。同时，摄食水平和温度显著
              Universal Blue qPCR SYBR Green Master Mix (上     影 响 三 角 帆 蚌 肠 道 和 肝 脏 中 脂 肪 酶 的 活 性
              海翊圣生物科技有限公司) 试剂盒，在                    CFX96      (P<0.05) (图  2)。在高摄食     13  和  23℃  处理下，
              Real-Time PCR Detection  系统  (Bio-Rad，美国)        两种组织的脂肪酶活性均呈下降趋势，而在                     23℃
              中进行     RT-qPCR。采用管家基因延伸因子                1-α    中摄食处理下呈上升趋势，并保持在较高水平
              (EF1α) 基因作为内参基因来标准化基因的表达                         (图  2-b，e)。此外，肠道和肝脏中纤维素酶活
              量，在验证       qPCR  的效率约为     100%  后，将每次          性均受摄食水平和温度的显著影响                     (P<0.05)
              反应后获得的阈值标准化为基因的                 C 值，重复     3     (图  3)。在  23℃  中摄食处理组中，两种组织的
                                                t
                                                       [15]
              个平行。mRNA       相对表达量根据        2 −∆∆C t 法计算 。     纤维素酶活性保持稳定，并在第                21  天显著高于
                   所 用 引 物 如 下 ， CPT1： F-5'-TGATG-             其他处理组      (P<0.05) (图  3-b，e)。因此，消化
              GCACAGGGAGTTGG-3′，R-5'-GCTGACTTAC-               酶活性在     23℃  中摄食处理组时相对较高且稳定。
              CATGGCTGGA-3′；LDLR：F-5′-ACCTAAAGT
                                                                2.3    代谢酶活性
              GTGGAGGCAGTG-3′，R-5′-TGGAGCGGCATA
                                                                   摄食水平和温度显著影响三角帆蚌肝脏中
              CGTGATTT-3′；EF1a：F-5′-GGAACTTCCCAG
                                                               谷丙转氨酶和谷草转氨酶的活性               (P<0.05) (图  4)。
              GCAGACTGTGC-3′，R-5′-TCAAACGGGCCGC
                                                               在  23℃  中摄食处理组中，谷丙转氨酶和谷草转
                         [16]
              AGAGAT-3′ 。
                                                               氨酶活性保持稳定，而其余各处理组中谷丙转
               1.5    数据分析
                                                               氨酶活性均呈下降趋势，谷草转氨酶活性大多
                   使用   SPSS 26  软件进行统计分析，所有数                  呈先上升后下降的趋势。在                23℃  的第   21  天，
              据表示为平均值±标准差             (mean±SD)。在分析之           中摄食处理组的两种转氨酶活性均显著高于低

              中国水产学会主办  sponsored by China Society of Fisheries                          https://www.china-fishery.cn
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