Page 79 - 《水产学报》2025年第10期

徐莹莹，等 水产学报, 2025, 49(10): 109606

表 1 实验饲料配方及近似组成 建成生物工程研究所有限公司生产的商业试剂
Tab. 1 Formulation and proximate composition of
盒 测 定 血 浆 中 葡 萄 糖 (A154-1-1)、 甘 油 三 酯
the different experimental diets %
(A110-1-1)、糖化血清蛋白 (GSP) (A037-2-1) 和
组别 group 晚期糖基化终末产物 (AGES)(H250-1-1) 的含量，
项目 item 对照组 高糖组 高糖+亮氨酸组 具体测定方法参照相关试剂盒说明书。
CON HC HCL
原料 ingredient 1.4 肝脏油红 O 测定
鱼粉 fish meal 34.00 34.00 34.00
取肝脏组织立即用 OCT 包埋剂包裹，使用
大豆浓缩蛋白 33.25 33.25 33.25
soy protein concentrate 恒温冷冻切片机 (−20 °C) 将组织切成 8~10 μm
鱼油 fish oil 8.00 8.00 8.00 切片。将切片浸入 60% 异丙醇中处理后，使用
玉米淀粉 corn starch 12.00 21.00 21.00 油红 O 染液试剂盒 (D027-1-1，南京建成生物工
微晶纤维素 4.00 0.00 0.00 程研究所有限公司) 对切片进行染色。最后，使
microcrystalline cellulose
用倒置显微镜 (尼康，TS100/TS100-F) 对切片进
小麦麸皮 wheat bran 5.00 0.00 0.00
行观察。
磷酸二氢钙 Ca(H 2 PO 4 ) 2 1.50 1.50 1.50
氯化胆碱 0.50 0.50 0.50 1.5 荧光定量 PCR(RT-PCR) 测定
choline chloride
参照 TaKaRa Plus RNA Purification 试剂盒
®
预混料 premix 1) 1.00 1.00 1.00
说明书进行肝脏组织 RNA 的提取。用超微量分
蛋氨酸 methionine 0.25 0.25 0.25
光光度计 N50 Touch 测量 RNA 的浓度和质量
赖氨酸 lysine 0.50 0.50 0.50
(OD /OD =1.8~2.2)。其后，按照 Prime Script ®
亮氨酸 leucine 0.00 0.00 2.00 260 280
RT reageat Kit 反转录试剂盒说明书要求反转录
近似组成 proximate composition (dry matter basis)
成 cDNA 作为模板。使用商业试剂盒 (TaKaRa,
水分 moisture 8.54 8.57 8.31
乙醚提取物 12.92 12.44 12.83 日本) 进行 RT-PCR 的分析。加样步骤：cDNA
ether extract ®
液 1 μL，SYBR Premix Ex TaqTM II 5 μL，上下
粗灰分 crude ash 12.77 9.96 9.95
游引物各 0.3 μL 和 ddH O 3.4 μL。使用 Real-
2
粗蛋白 crude protein 44.28 44.13 46.07
Time PCR Detection System (CFX96 Touch, Bio-
粗纤维 crude fiber 10.25 4.09 3.95
Rad，美国)，反应程序设定：①预变性，95 °C
可消化性糖 11.24 20.81 20.89
digestible carbohydrate 2) 2 min；②变性，95 °C 30 s；③60 °C 30 s，72
注：1) 预混料为每千克饲料提供CaCO 3 314.0 g，KH 2 PO 4 469.3 g， °C 30 s，39 个循环；④熔解曲线，95 °C 15 s；
MgSO 4 ·7H 2 O 147.4 g. NaCl 49.8 g，FeSO 4 ·7H 2 O 10.9 g， 60 °C 1 min；95 °C 15 s。每个基因做 4 个重复。
CuSO 4 ·5H 2 O 0.62 g，ZnSO 4 ·7H 2 O 4.67 g，MnSO 4 ·7H 2 O 3.12 g，KI
选择 ef1α 对目的基因的 C 值进行归一化处理，
t
0.16 g，CoCl 2 ·6H 2 O 0.08 g，(NH₄)₆Mo₇O 24 ·4H₂O 0.06 g，NaSeO 3 使用 −∆∆C t 法来计算基因的相对表达量。实验所
0.02 g，VA 500 000 IU，VC 10 000 mg，VD 3 50 000 IU, VE 2 500 mg， 2
需引物的序列和扩增效率见表 2。
VK 3 1 000 mg，VB 1 5 000 mg，VB 2 5 000 mg，VB 6 5 000 mg，VB 12

5 mg，肌醇 25 000 mg，泛酸 10 000 mg，胆碱 100 000 mg，烟酸
1.6 数据处理和统计分析
25 000 mg，叶酸 1 000 mg，生物素 250 mg。2) 可消化性糖含量 =
100 –(水分+粗蛋白+乙醚提取物+粗灰分+粗纤维)。 特 定 生 长 率 (SGR， %/d)=(lnW - lnW ) ×
t
0
Notes: 1) per kilogram of premix supplied CaCO 3 314.0 g, KH 2 PO 4
100 / T；
469.3 g, MgSO 4 ·7H 2 O 147.4 g, NaCl 49.8 g, FeSO 4 ·7H 2 O 10.9 g,
增重率 (WGR，%)=(W - W )/ W ×100%；
CuSO 4 ·5H 2 O 0.62 g, ZnSO 4 ·7H 2 O 4.67 g, MnSO 4 ·7H 2 O 3.12 g, KI 0.16 t 0 0
g, CoCl 2 ·6H 2 O 0.08 g, (NH₄)₆Mo₇O24·4H₂O 0.06 g, NaSeO 3 0.02 g, 饲料转化率 (FCR，%)=[S/(W - W )]×100%；
t
0
肝体指数 (HSI，%)=H/F×100%；
VA 500 000 IU, VC 10 000 mg, VD 3 50 000 IU, VE 2 500 mg, VK 3
1 000 mg, VB 1 5 000 mg, VB 2 5 000 mg, VB 6 5 000 mg, VB 12 5 mg,
式中，W 和 0 W 分别表示初重和末重 (g)，T 代
t
inositol 25 000 mg, pantothenic acid 10 000 mg, choline 100 000 mg, niacin
表养殖天数 代表饲料投喂量 代表
25 000 mg, folic acid 1 000 mg, biotin 250 mg. 2) digestible (d)，S (g)，H
carbohydrate content = 100 – (moisture + crude protein + ether extract + 肝脏重 (g)，F 代表鱼体重 (g)。
ash +crude fiber).
数据用 SPSS 19.0 进行单因素方差分析, 并
中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries https://www.china-fishery.cn
3