Page 78 - 《水产学报》2025年第10期
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徐莹莹，等                                                                水产学报, 2025, 49(10): 109606

              损伤鱼体免疫机能，引起养殖鱼类大量死亡 。                            其纯度> 99%。以鱼粉和大豆浓缩蛋白为主要蛋
                                                        [2]
              因此，深入调查鱼类糖代谢功能障碍的分子机                             白质源，鱼油为主要脂肪源，玉米淀粉为主要
              制并寻求科学有效的途径以改善其代谢机能，                             糖源，配制成       3  种不同的实验饲料，即对照组
              对水产养殖业的持续健康发展具有重大意义。                             饲料   CON (10%  糖水平)，高糖组饲料           HC (20%
                   亮氨酸    (Leu) 是一种支链氨基酸，作为一                   糖水平)，高糖+亮氨酸组饲料              (HCL) (20%  糖水
              种高需求量的必需氨基酸，其可参与机体糖脂                             平+2.0%  亮氨酸)。饲料配方及营养组分见表                  1。
              代谢功能的调节过程。大鼠                (Rattus norvegicus)  由于大口黑鲈饲料中适宜的糖水平为                     10% ，
                                                                                                        [7]
              相关研究发现，亮氨酸可通过上调葡萄糖转运                             因此，20%     糖水平的饲料被认为是高糖饲料。
              体  2(GLUT2) 和葡萄糖激酶        (GK) 等糖酵解相关                   [8]
                                                               Shao  等 在大口黑鲈上的研究表明，饲料中添
              基因的表达，同时下调磷酸烯醇式丙酮酸羧激                             加  2.0%  亮氨酸能够促进该鱼的生长。因此，本
              酶  (PEPCK) 等糖异生相关基因的表达，从而降
                                                               实验中设置      2.0%  亮氨酸添加量以探究其对摄食
              低机体血糖水平 。此外，小鼠                 (Mus musculus)
                              [3]
                                                               高糖饲料大口黑鲈生长性能及肝脏糖脂代谢功
              相关研究表明，亮氨酸能通过激活过氧化物增
                                                               能的影响。
              氧剂激活受体        α (PPARα) 及其下游靶分子肉碱
                                                                   挑选体质健壮、规格整齐的大口黑鲈幼鱼
              棕榈酰转移酶         Ia (CPTIa) 来增强肝脏线粒体         β
              氧化功能，并抑制固醇调节元件结合蛋白                         1     [ 体均重   (5.35 ± 0.04) g] 240  尾，随机分成   3  组，
                                                               每组   4  个重复，每个重复         20  实验鱼。实验在
              (SREBP1)等脂质合成相关基因的表达，从而改
              善机体的脂肪肝症 。然而，以上结果均来自                             12  个室内循环养殖缸         (容量  500 L) 中进行，每
                                [4]
              哺乳动物上的研究报道。水产动物上，饲料中                             组鱼对应投喂一种饲料，养殖               12  周，每天饱食
              适宜的亮氨酸水平           (1.72%) 可通过激活胰岛素              投喂   3  次  (8：00、12：00   和  18：00)。在此期
              信 号 通 路 和 糖 酵 解 途 径 ， 进 而 降 低 团 头 鲂              间，光周期     12 h：12 h (黑暗：光明)、水温        (30.3 ±
              (Megalobrama amblycephala) 的血糖水平 。虹              3.0) °C、水  pH 7.4~7.5，溶解氧含量 > 5.1 mg/L，
                                                    [5]
              鳟  (Oncorhynchus mykiss) 相关研究发现，饲料               氨氮含量 < 0.5 mg/L。本研究获得了华南农业
              中添加亮氨酸可通过上调脂肪酸合成酶                      (FAS)     大学实验动物管理和使用伦理委员会批准，实
              等脂质合成相关基因的表达，进而增强鱼体肝                             验过程中操作人员严格遵守华南农业大学伦理
              脏的脂质合成功能 。然而，上述研究是在正                             规范，并按照华南农业大学伦理委员会制定的
                                [6]
              常饲料糖水平下开展的调查。鱼类摄食高糖饲                             规章制度执行。

              料后，亮氨酸影响鱼体糖脂代谢功能的潜在机                             1.2    样品采集
              制尚不明确，且其能否缓解鱼体因摄入高糖饲
              料带来的不良反应有待进一步研究。                                     养殖结束后，停止投食              24 h。用浓度为
                   大口黑鲈     (Micropterus salmoides) 是一种具       100 mg/L  的  MS-222  将鱼进行麻醉处理，计算
              有重要经济价值的淡水肉食性养殖鱼类。然而，                            出每缸鱼的尾数及重量。每缸取                 4  尾实验鱼放
              相较草食和杂食性鱼类，该鱼的糖耐受能力较                             置于−80 °C   用于体成分指标的测定。再每缸随
              低，过高的饲料糖水平             (> 10%) 会使其产生高            机捞取    4  尾实验鱼，并从尾静脉采集血液样本，
              血糖症状，并引发代谢功能紊乱，进而抑制鱼                             将血放置于预先准备好的肝素抗凝管中，3 000
              体生长 。鉴于此，本实验以大口黑鲈为研究                             r/min  离心  10 min (4 °C)，所得血浆置于−80 °C
                     [7]
              对象，分析高糖饲料中添加亮氨酸对该鱼生长                             用于血浆生化指标的测定。抽血后的实验鱼解
              性能及肝脏糖脂代谢功能的影响，并调查其潜                             剖分离出肝脏组织，称重后放置于−80 °C                  用于
              在的分子机制，以期为鱼类糖脂代谢的调控及
                                                               RNA  的提取。再每缸取          4  尾实验鱼进行解剖，
              水产饲料配方的优化提供参考。
                                                               分离出肝脏样品用于油红             O检测。


              1    材料与方法                                       1.3    饲料和鱼体营养成分及血浆生化指标测定

                                                                   根据美国分析化学家协会                (Association of
              1.1    实验饲料和饲养管理
                                                               Official Analytical Chemists，AOAC) 的相关方法
                                                                                              [9]
                   亮氨酸购自江苏采薇生物科技有限公司，                          对饲料和鱼体营养成分进行测定 。使用南京
              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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