Page 203 - 《水产学报》2025年第8期

王玲，等 水产学报, 2025, 49(8): 089417

VIP 的 mRNA 绝对表达量出现显著变化，分别 5 海水组 SW **
为 3.31、3.12、3.11、3.42 和 3.26 lg(拷贝数/mL)， 灿烂弧菌组 Vs **
*
分别为 SW 组的 1.12 (P<0.001)、1.19 (P<0.001)、 4 ** * ** **
1.08 (P<0.01)、1.05 (P<0.05) 和 1.04 倍 (P<0.05)
(图 6)。 3
CgSVIP 的绝对表达量 absolute expression values of CgSVIP

海水组 SW *** ** * * 2 1
灿烂弧菌组 Vs
4
***
CgSVIP 的绝对表达量 absolute expression values of CgSVIP 3 图 7 2023 年 3 3—10 4 月采集长牡蛎在灿烂弧菌刺激
0
5
10
9
7
8
6
月份/月
2
month
1
后的
绝对表达量
12 h
CgSVIP mRNA
Fig. 7 The absolute expression values of
0
0 3 6 12 24 48 72 CgSVIP mRNA in C. gigas after 12 h of V. splendidus
刺激时间/h stimulation from March to October 2023
time after stimulation 重组蛋白表达、纯化及其多克隆
图 6 灿烂弧菌刺激后长牡蛎血淋巴细胞中 CgSVIP 的 2.6 CgSVIP
抗体制备
mRNA 绝对表达量
“*” 表示 P＜0.05，下同。
为了进一步阐明 CgSVIP 作为长牡蛎病害
Fig. 6 The absolute expression values of CgSVIP
预警潜在生物标志物的生物学功能，实验进行
mRNA in C. gigas after V. splendidus stimulation
了 CgSVIP 重组蛋白表达、纯化及其多克隆抗
"*" indicates P＜0.05, the same below.
体 制 备 。 利 用 12.5% SDS-PAGE 电 泳 分 析 ，
检测了 2023 年 3—10 月采集的长牡蛎在灿 IPTG 诱 导 前 后 ， 带 有 重 组 质 粒 pGEX4T-1-
烂弧菌刺激 12 h 后的 CgSVIP mRNA 绝对表达 SVIP 的感受态 Transetta (DE3) 大肠杆菌裂解沉
量变化。除 3 月外，其他各月长牡蛎血淋巴细 淀中，在 25.0~35.0 ku 中间观察到一条明显的
胞中 CgSVIP 的 mRNA 绝对表达量与 SW 组相 条带，表明 CgSVIP 重组蛋白被成功诱导表达，
比均显著升高，其中 SW 组的 mRNA 绝对表达 对纯化后的 rCgSVIP 进行分析，发现了明显的
量分别为 3.14、3.05、3.09、3.15、3.21、3.30 单一条带，与预测的 rCgSVIP 蛋白相对分子质
和 3.65 lg(拷贝数/mL)，Vs 组的 mRNA 绝对表 量 (34.899 ku) 大小一致。使用上述纯化后的重
达 量 分 别 为 3.52、 3.57、 3.45、 4.42、 3.77、 组蛋白注射小鼠，得到 CgSVIP 多克隆抗体，
3.75 和 4.06 lg(拷 贝 数 /mL)， 分 别 为 SW 组 的 并进行 Western blot 分析。结果显示，出现一条
1.12 (P<0.01)、 1.17 (P<0.05)、 1.12 (P<0.05)、 单一目的条带，蛋白相对分子质量为 8.899 ku，
1.40 (P<0.01)、1.18 (P<0.01)、1.14 (P<0.01) 和 与预测 CgSVIP蛋白大小一致 (图 8)。

1.11 倍 (P<0.01)，其中 CgSVIP 的 mRNA 绝对
2.7 CBZ 刺激长牡蛎后 CgSVIP 在血淋巴细胞
表达量在 7 月遭受灿烂弧菌刺激时变化最显著
中的蛋白表达水平变化
(图 7)。综上，长牡蛎在实验室和养殖过程中遭
受 PAMPs/病原刺激时，CgSVIP 的 mRNA 绝对 为解析 CgSVIP 在长牡蛎血淋巴细胞自噬
表达量为 3.18~3.79 lg(拷贝数/mL)，在正常状态 过程中的蛋白表达水平变化，实验检测了 CBZ
下 CgSVIP 的 mRNA 绝 对 表 达 量 为 2.93~3.35 刺激长牡蛎后血淋巴细胞中的 CgSVIP 蛋白表
lg(拷贝数/mL)，初步认为 CgSVIP 用于长牡蛎 达水平。在注射 CBZ 12 h 后，与 DMSO 相比，
病害预警的 mRNA 绝对表达量阈值为 3.35 lg DMSO+CBZ 组长牡蛎血淋巴细胞中 CgSVIP 的
(拷贝数/mL)。 蛋白表达水平显著上升。通过 Image J 进行灰度

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