Page 204 - 《水产学报》2025年第8期
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王玲,等                                                                  水产学报, 2025, 49(8): 089417


                   M  1   2  3            M    4               基因   mRNA  表达的影响,实验检测了在注射
                ku                     ku
                80                     80                      CgSVIP  干扰片段和      LPS  刺激后长牡蛎血淋巴
                60
                                       60                      细 胞 中                                     和
                45                     45                              CgSVIP、 CgP62、 CgLC3、 CgAtg5
                35                     35                      CgBeclin1  的  mRNA  相对表达水平。首先验证
                               rCgSVIP
                                       25                      CgSVIP RNAi 的干扰效率,与           NC-RNAi 组相
                25
                                                               比,CgSVIP-RNAi 组的      CgSVIP mRNA   相对表达
                                       15
                15                                             水平显著下降,为         NC-RNAi 组的    9% (P<0.001)。
                                       10
                10                                  CgSVIP     干扰   CgSVIP  表达并   LPS  刺激   12 h,检测长牡
                                                               蛎血淋巴细胞中         CgSVIP、CgLC3、CgBeclin1、
                        (a)                   (b)              CgATG5  和  CgP62  的  mRNA  相对表达水平。结
                 图 8    CgSVIP  重组蛋白的表达、纯化和抗体验证                果 显 示 , 与   NC-RNAi+LPS   组 相 比 , CgSVIP-
              (a) CgSVIP  重组蛋白的表达和纯化,(b) CgSVIP  的抗体验证;M.      RNAi+LPS  组  CgSVIP  及自噬相关基因        CgLC3、
              蛋白分子量标准,1. 诱导前菌液,2. 诱导后菌液,3. 纯化的         CgS-
                                                               CgBeclin1、CgATG5   和  CgP62  的  mRNA  相对表
              VIP  重组蛋白,4. CgSVIP  抗体。
                                                               达水平均显著降低,分别为                NC-RNAi+LPS   组
                     Fig. 8 The expression, purification and
                                                               的  53% (P<0.001)、16% (P<0.001)、38% (P<0.001)、
                antibody verification of CgSVIP recombinant protein
                                                               19% (P<0.01) 和  40% (P<0.01) (图  10)。
              (a) the expression and purification of CgSVIP recombinant protein, (b)
              antibody validation of CgSVIP; M. protein molecular weight standard, 1.
                                                               2.9    CgSVIP RNAi 和  LPS  刺激后长牡蛎血淋
              pre-induction bacterial solution, 2. induced bacterial solution, 3. purified
              CgSVIP recombinant protein, 4. CgSVIP antibody.  巴细胞中     CgLC3  蛋白表达变化
              分析,发现       DMSO+CBZ   组的   CgSVIP  蛋白表达             为揭示    CgSVIP  对血淋巴细胞自噬的影响,
              水平为    DMSO   组的   1.67  倍  (P<0.001) (图  9)。    实验检测了在注射         CgSVIP  干扰片段和     LPS  刺激

                                                               后长牡蛎血淋巴细胞中            CgLC3  蛋白表达变化。
              2.8    CgSVIP RNAi 和  LPS  刺激后血淋巴细胞
                                                               结果显示,NC-RNAi+LPS         组和   CgSVIP-RNAi+
              中自噬相关基因的          mRNA   相对表达水平
                                                               LPS  组 中  CgLC3  蛋 白 均 由    CgLC3Ⅰ 切 割 为
                   为揭示    CgSVIP  对血淋巴细胞中自噬相关                  CgLC3Ⅱ,CgSVIP-RNAi+LPS      组中   CgLC3Ⅰ切


                                    M   1       2
                               ku                                   2.0         ***
                              25.0
                                                                CgSVIP 的蛋白水平  protein levels of  CgSVIP
                              15.0                                  1.5

                              10.0
                                                      CgSVIP        1.0

                              80.0
                              60.0                    β-tubulin     0.5

                              45.0
                                                                     0
                                                                             1       2
                                                                               组别
                                                                               group
                                           (a)                                  (b)
                                   图 9    CBZ  刺激长牡蛎后血淋巴细胞中        CgSVIP  的蛋白表达水平
              (a) 长牡蛎血淋巴细胞中    CgSVIP  蛋白表达情况,(b) 灰度分析;M. 蛋白分子质量标准,1. DMSO     组,2. DMSO+CBZ  组。
                            Fig. 9 The protein levels of CgSVIP in haemocyte of C. gigas after CBZ stimulation
              (a)  the  expression  of  CgSVIP  protein  in  haemocyte  of  C.  gigas,  (b)  the  analysis  of  gray;  M.  protein  molecular  weight  standard,  1.  DMSO,  2.
              DMSO+CBZ.

              中国水产学会主办  sponsored by China Society of Fisheries                          https://www.china-fishery.cn
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