Page 204 - 《水产学报》2025年第8期
P. 204
王玲,等 水产学报, 2025, 49(8): 089417
M 1 2 3 M 4 基因 mRNA 表达的影响,实验检测了在注射
ku ku
80 80 CgSVIP 干扰片段和 LPS 刺激后长牡蛎血淋巴
60
60 细 胞 中 和
45 45 CgSVIP、 CgP62、 CgLC3、 CgAtg5
35 35 CgBeclin1 的 mRNA 相对表达水平。首先验证
rCgSVIP
25 CgSVIP RNAi 的干扰效率,与 NC-RNAi 组相
25
比,CgSVIP-RNAi 组的 CgSVIP mRNA 相对表达
15
15 水平显著下降,为 NC-RNAi 组的 9% (P<0.001)。
10
10 CgSVIP 干扰 CgSVIP 表达并 LPS 刺激 12 h,检测长牡
蛎血淋巴细胞中 CgSVIP、CgLC3、CgBeclin1、
(a) (b) CgATG5 和 CgP62 的 mRNA 相对表达水平。结
图 8 CgSVIP 重组蛋白的表达、纯化和抗体验证 果 显 示 , 与 NC-RNAi+LPS 组 相 比 , CgSVIP-
(a) CgSVIP 重组蛋白的表达和纯化,(b) CgSVIP 的抗体验证;M. RNAi+LPS 组 CgSVIP 及自噬相关基因 CgLC3、
蛋白分子量标准,1. 诱导前菌液,2. 诱导后菌液,3. 纯化的 CgS-
CgBeclin1、CgATG5 和 CgP62 的 mRNA 相对表
VIP 重组蛋白,4. CgSVIP 抗体。
达水平均显著降低,分别为 NC-RNAi+LPS 组
Fig. 8 The expression, purification and
的 53% (P<0.001)、16% (P<0.001)、38% (P<0.001)、
antibody verification of CgSVIP recombinant protein
19% (P<0.01) 和 40% (P<0.01) (图 10)。
(a) the expression and purification of CgSVIP recombinant protein, (b)
antibody validation of CgSVIP; M. protein molecular weight standard, 1.
2.9 CgSVIP RNAi 和 LPS 刺激后长牡蛎血淋
pre-induction bacterial solution, 2. induced bacterial solution, 3. purified
CgSVIP recombinant protein, 4. CgSVIP antibody. 巴细胞中 CgLC3 蛋白表达变化
分析,发现 DMSO+CBZ 组的 CgSVIP 蛋白表达 为揭示 CgSVIP 对血淋巴细胞自噬的影响,
水平为 DMSO 组的 1.67 倍 (P<0.001) (图 9)。 实验检测了在注射 CgSVIP 干扰片段和 LPS 刺激
后长牡蛎血淋巴细胞中 CgLC3 蛋白表达变化。
2.8 CgSVIP RNAi 和 LPS 刺激后血淋巴细胞
结果显示,NC-RNAi+LPS 组和 CgSVIP-RNAi+
中自噬相关基因的 mRNA 相对表达水平
LPS 组 中 CgLC3 蛋 白 均 由 CgLC3Ⅰ 切 割 为
为揭示 CgSVIP 对血淋巴细胞中自噬相关 CgLC3Ⅱ,CgSVIP-RNAi+LPS 组中 CgLC3Ⅰ切
M 1 2
ku 2.0 ***
25.0
CgSVIP 的蛋白水平 protein levels of CgSVIP
15.0 1.5
10.0
CgSVIP 1.0
80.0
60.0 β-tubulin 0.5
45.0
0
1 2
组别
group
(a) (b)
图 9 CBZ 刺激长牡蛎后血淋巴细胞中 CgSVIP 的蛋白表达水平
(a) 长牡蛎血淋巴细胞中 CgSVIP 蛋白表达情况,(b) 灰度分析;M. 蛋白分子质量标准,1. DMSO 组,2. DMSO+CBZ 组。
Fig. 9 The protein levels of CgSVIP in haemocyte of C. gigas after CBZ stimulation
(a) the expression of CgSVIP protein in haemocyte of C. gigas, (b) the analysis of gray; M. protein molecular weight standard, 1. DMSO, 2.
DMSO+CBZ.
中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries https://www.china-fishery.cn
9