Page 163 - 《水产学报》2025年第8期

何浩斌，等 水产学报, 2025, 49(8): 089614

缅甸鱼粉 越南鱼粉 日本鱼粉 狐狸、水貂、貉子和狗源性成分进行检测，灵

Myanmar fish meal Vietnamese fish meal Japanese fish meal
国产鱼粉2 秘鲁鱼粉 进口超级鱼粉
domestic fish meal 2 Peruvian fish meal imported super fish meal 敏度达到 0.010 0 ng/μL。郑文文 [30] 基于牛、羊
2 000 巴基斯坦鱼粉 缅甸鱼粉 Myanmar fish meal 特异 12S rRNA 基因创建荧光定量 PCR 检测方
国产鱼粉1
Pakistani fish meal
domestic fish meal 1
相对荧光单位/RFU relative fluorescence unit 1 500 巴基斯坦鱼粉 Pakistani fish meal 法 ， 可 分 别 检 测 饲 料 中 最 低 0.080 0 ng/μL、
国产鱼粉2 domestic fish meal 2
DNA。尹兵
浓度的牛、羊源性
[31]
0.060 0 ng/μL
1 000
越南鱼粉 Vietnamese fish meal
基于
基因对饲料中牛羊源性成分进行检测，
Cytb
秘鲁鱼粉 Peruvian fish meal
500
最低检出限可达
0.520 0 ng/mL。不同物种不同
国产鱼粉1 domestic fish meal 1
日本鱼粉 Japanese fish meal
20
表明荧光定量
10
0 进口超级鱼粉 imported super fish meal 30 40 基因检测的灵敏度不同，但基本均达到 ng 级别，
检测方法具有较高的灵敏度。
PCR
循环数/个 另外，同一物种不同基因的荧光定量 PCR 的灵
cycles
敏度也存在差异，张弛等 [32] 基于鸭线粒体 Cytb
图 4 8 种不同来源的鱼粉样品 RT-PCR 扩增曲线
基因开发肉制品中鸭源性成分的荧光定量 PCR
Fig. 4 RT-PCR amplification curves of 8
技术，其检测灵敏度为 1.780 0 pg/μL。程欣等 [33]
different fish meal samples
基于细胞核基因 (IL-2) 序列鸭源性成分的 RT-
用于畜禽及水产饲料生产。然而由于其需求量
PCR 检测，其灵敏度为 0.500 0 pg/μL。二者均
大、价格昂贵，市面上鱼粉存在较为严重的掺
针对鸭源性成分进行检测，灵敏度相差近 4 倍，
杂掺假现象。目前鱼粉质量鉴定主要以镜检法
可能与不同基因在细胞里面的拷贝数不同或引
为主 [11-12] ，辅以特定物理、化学方法进行补充，
物的特异性结合强弱有关。本研究设计的引物
或采用近些年发展的近红外光谱技术法，可针
对尼罗罗非鱼源性成分最低检测限为 0.100 0
对鱼粉中与鱼粉结构特征差异较大的掺杂成分
ng/μL，虽然灵敏度不如上述部分研究，但是对
如羽毛粉、鸡肉粉、肉骨粉等有效检出。但上
于鱼粉中尼罗罗非鱼源性成分鉴定已经足够。
述方法存在漏检率较高、灵敏度不强、只能定
目前鱼粉掺假鉴定方法中宏观方法很难检测出
性无法定量的问题，并对同是鱼类物种的掺杂
物无法区分。以 DNA 为基础的 RT-PCR 检测方 如此低微的含量，而本研究首次尝试建立基于
法，其灵敏度高、特异性强，并可有效进行定 RT-PCR 技术的鉴定方法，在灵敏度方面已取
量分析，在畜禽饲料、肉制品及食品掺杂方面 得较大的突破。
检测已得到广泛应用 [24-28] ，但在鱼粉检测方面， 通过设计不同含量尼罗罗非鱼源性成分实
目前并无相关报道。本研究首次开发基于 RT- 验检测，本研究开发方法可检测出含量低至
PCR 的检测方法，应用于鱼粉掺杂鉴定，选取 0.010 0% 的尼罗罗非鱼成分。杨瑶等 [34] 研发的
了常见的掺杂物尼罗罗非鱼作为鉴定对象，基 肉制品中猪源性成分检测技术，可准确检测猪
于尼罗罗非鱼特定基因设计引物，对尼罗罗非 肉含量低至 5.000 0% 的肉制品。庞杰等 [35] 建立
鱼及其他鲈形目、鲤形目等常见鱼类 50 种与虾 的鱼肉骨粉样品检测技术，可检测出鱼肉粉
蟹类 5 种的 DNA 进行检测，结果发现仅尼罗罗 0.050 0% 的含量。罗建兴等 [36] 开发的检测食品
非鱼出现特异性扩增曲线，其他鱼类与虾蟹类 中鸡源性成分方法，成分含量低至 0.000 1% 均
均未检出，表明该方法具有明显的尼罗罗非鱼 可被检测。这些研究结果进一步表明 RT-PCR
源特异性，可用于尼罗罗非鱼源性成分检测与 检测技术的高灵敏性。而针对不同的物种样品，
鉴定。同时，本方法不需要设计复杂又昂贵的 采用不同的基因开发的检测技术，所得到的待
荧光探针，也无需后续的电泳以及紫外拍照等 检样品含量最低检测限不同，可能与上述所说
操作，快速简便，成本低廉，可有效应用于实际。 的不同基因在生物体里面的拷贝数不同或者跟
在灵敏度方面，本研究设计的尼罗罗非鱼 引物的特异性结合能力有关。这就需要对研发
特异性引物可检测到浓度在 0.100 0 ng/μL 水平 的方法针对性建立相应的标准曲线，才可较好
的 DNA，即可检测出 100.000 0 pg 的尼罗罗非 的对样品进行定量分析。目前大部分研究针对
鱼源 DNA。刘艳艳等 [29] 基于 16S rRNA 基因所 动物源性成分定量检测，均通过建立标准曲线，
开发的多重实时荧光定量 PCR 方法，对饲料中 计算相应的回归方程来计算分析 [30, 32, 35-37] 。本研

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