Page 60 - 《水产学报》2025年第6期

梁肖，等 水产学报, 2025, 49(6): 069605

1.5 ** 1.5 ***
sox9 基因相对表达量 relative expression of level sox9 1.0 sox9 基因相对表达量 relative expression of level sox9 1.0

0.5
0.5

0 0
1 2 3 4
实验组别 实验组别
experimental group experimental group
(a) (b)
图 1 慢病毒表达载体的有效性分析
RT-qPCR 检测经过 LV-sox9-shRNA (a) 干扰和 LV-sox9-OE (b) 过表达载体系统侵染后，第 16 期性腺中 sox9 mRNA 的表达变化情况。1. ZZ
对照组，2. ZZ+sox9-shRNA 处理组，3. ZW 对照组，4. ZW+sox9-OE 处理组；**. P<0.01，***. P<0.001。
Fig. 1 Efficacy analysis of lentivirus expression vectors
RT-qPCR analysis showed that expression changes of sox9 mRNA in gonads of stage 16 after LV-sox9-shRNA (a) and LV-sox9-OE (b) vector systems
infection. 1. ZZ control group, 2. ZZ+sox9-shRNA treated group, 3. ZW control group, 4. ZW+sox9-OE treated group; **. P<0.01, ***. P<0.001.
至第 27 期时甚至出现空腔，而皮质区高度发育 mRNA 表达较低；相反，在对照组 ZW 性腺中
布满生殖细胞 (图版Ⅰ-6，7，10，11，14，15)， dmrt1 和 amh 低 表 达 ， foxl2 高 表 达 。 敲 低
此时性腺由雄性完全逆转为雌性。 sox9 后，ZZ 性腺中 dmrt1 和 amh mRNA 水平出

sox9 敲低后 ZZ 胚胎性腺中生殖细胞的分 现显著下调，而 foxl2 mRNA 则显著上调 (图 2)。
布变化 通过生殖细胞特异性 VASA 蛋白的 此外，通过免疫双标染色检测了 sox9 敲低后第
免疫荧光染色发现，生殖细胞主要分布在对照 21 期 (图版Ⅲ-a) 和第 27 期 (图版Ⅲ-b) 性腺中
组 ZZ 性腺髓质区性索上 (图版Ⅱ-1，5，9，13) DMRT1 和 FOXL2 蛋白的表达分布变化。结果
和 ZW 性腺的皮质区内 (图版Ⅱ-4，8，12，16)。 显示，DMRT1 大量分布于对照组 ZZ 性腺髓质
在 sox9 敲低后第 21 期 ZZ 性腺中，生殖细胞在 区性锁上 sertoli 细胞的细胞核中 (图版Ⅲ-a-1，9，
皮质区和髓质区均有分布 (图版Ⅱ-2，3，6，7)， 图版Ⅲ-b-1，9)，而在对照组 ZW 性腺中未见其
至 27 期时，生殖细胞在大部分处理性腺中呈现 表达信号 (图版Ⅲ-a-4，12，图版Ⅲ-b-4，12)；
完全类雌性的皮质区分布模式(图版Ⅱ-10，11， FOXL2 主要定位在 ZW 性腺体细胞的细胞核中
14，15)，进一步证明了性逆转的发生。实验中 (图版Ⅲ-a-8，12，图版Ⅲ-b-8，12)，而在 ZZ 性
以 CTNNB1 (一 种 细 胞 黏 附 蛋 白 ， 与 膜 蛋 白 腺中没有检测到其荧光信号 (图版Ⅲ-a-5，9，
结合) 的免疫荧光染色来辅助显示性腺的内部结 图版Ⅲ-b-5，9)。敲低 sox9 后，在全部 ZZ 性腺
构，该蛋白主要位于中华鳖雄性性腺髓质区 中 FOXL2 蛋白均被诱导且出现大量表达，而
性索细胞以及雌性性腺皮质区细胞的细胞膜上 DMRT1 蛋白的表达量则急剧下调甚至几乎消
(图版Ⅱ)。 失 (性逆转彻底，ZZ 卵巢) (图版Ⅲ-a-3，7，11，

sox9 敲低后 ZZ 胚胎性腺中雌雄特异性基 图版Ⅲ-b-2，3，6，7，10，11)，仅在第 21 期
因和蛋白的表达分布变化 为了进一步验证 少量 ZZ 性腺 (2/15) 中，同时检测到了 DMRT1
雄转雌性逆转现象的发生，从分子水平分析了 和 FOXL2 两种蛋白表达的荧光信号 (性逆转不
敲低 sox9 基因对雄性分化因子 dmrt1(图 2-a) 和 彻底，ZZ 卵睾丸) (图版Ⅲ-a-2，6，10)。

amh (anti-müllerian hormone) (图 2-b) 以及雌性分 LV-sox9-shRNA 侵染 ZZ 胚胎后性腺的雌
化因子 foxl2 (forkhead box L2) (图 2-c) 表达的影 雄数量及性逆转率 以上结果充分证明，敲
响。RT-qPCR 结果显示，在第 27 期对照组 ZZ 低 sox9 基因确实能够诱导中华鳖 ZZ 性腺向雌
性腺中，dmrt1 和 amh mRNA 丰富表达，foxl2 性 完 全 逆 转 。 数 据 统 计 显 示 ， 在 LV-sox9-

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