Page 146 - 《水产学报》2023年第1期

李晓晖，等 水产学报, 2023, 47(1): 019610

HIF-1α mRNA 5′UTR 3′UTR

miR-17a-5p: 3′ AUGGACGUGACAUUCGUGAAAC 5′
WT-HIF-1α3′UTR: 5′ TTAAAATTGTAATAGATGACCT GCAC TT TC 3′
MUT-HIF-1α 3′UTR: 5′ TTAAAATTGTAATAGATGACCT CGTGAAAC 3′
(a)

1.5 a a

相对荧光素酶活性 relative luciferase activity 1.0 a b

0.5

0
1 2 3 4
WT-pmirGLO-HIF-1α 3′UTR + + − −
MUT-pmirGLO-HIF-1α 3′UTR − − + +
mimics NC + − + −
mimics miR-17a-5p − + − +
不同组合
different groups
(b)
图 5 miR-17a-5p 与 HIF-1α 的靶向关系验证
(a) miR-17a-5p 与 HIF-1α 3'UTR 的结合位点序列，红色加下划线表示 miR-17a-5p 和 WT-HIF-1α 3'UTR 的结合位点序列，红色不加下划线表
示 MUT-HIF-1α 3'UTR 中结合位点互补序列。(b) 双荧光素酶报告基因检测 miR-17a-5p 与 HIF-1α 的靶向关系。1. WT-pmirGLO-HIF-1α
3'UTR 质粒与 mimics NC 共转染；2. WT-pmirGLO-HIF-1α 3'UTR 质粒与 mimics miR-17a-5p 共转染；3. MUT-pmirGLO-HIF-1α 3'UTR 质粒与
mimics NC 共转染；4. MUT-pmirGLO-HIF-1α 3'UTR 质粒与 mimics miR-17a-5p 共转染。“+”表示添加，“-”表示不添加。不同字母表示存在
显著差异，P<0.05，图 6 和图 7 同
Fig. 5 miR-17a-5p binds to the 3′UTR region of HIF-1α
(a) the sequence of the bind site of miR-17a-5p and HIF-1α 3'UTR, the red underlined sequence represents the binding site sequence of miR-17a-5p and
WT-HIF-1a 3'UTR, while the red ununderlined sequence represents the complementary binding site sequence in MUT-HIF-1a 3'UTR. (b) dual-luci-
ferase reporter gene assay verified the targeted relationship between HIF-1α and miR-17a-5p. 1. 293T cells co-transfected with the WT-pmirGLO-HIF-
1α 3'UTR plasmid and mimics NC; 2. 293T cells co-transfected with the WT-pmirGLO-HIF-1α 3'UTR plasmid and mimics miR-17a-5p; 3. 293T cells
co-transfected with the MUT-pmirGLO-HIF-1α 3'UTR plasmid and mimics NC; 4. 293T cells co-transfected with the MUT-pmirGLO-HIF-1α 3'UTR
plasmid and mimics miR-17a-5p. "+" and "−" represent addition and no addition, respectively. Different letters indicate the existence of a significant dif-
ference, P<0.05, the same as Fig. 6 and Fig. 7
能在鲢肝脏低氧适应过程中发挥重要作用。 诱导黑点青鳉卵巢中的 miRNAs 调控失调，抑制
miRNAs 靶向多种类固醇生成酶，改变类固醇生
3 讨论
成酶和激素受体。
低氧胁迫对鲢的生长、运动、免疫等各方面 研究发现，在低氧胁迫下，鲢 miR-17a-5p 存
[14]
都有潜在的不利影响，严重影响肝脏和鳃等组织 在差异表达 。在本研究中，进一步探讨了 miR-
[26]
的功能 。越来越多的研究证实，miRNA 在许多 17a-5p与其靶基因的关系及其调控机制。多重序
水生生物的低氧应激反应中发挥着重要作用 [27] 。 列比对发现，miR-17 序列在不同物种中具有高度
在低氧胁迫下，黑点青鳉 (O. melastigma) 的 miR- 保守性，对 miR-17a-5p 的靶基因预测获得包括低
125-5p 可靶向常染色质组蛋白赖氨酸 N-甲基转移 氧诱导因子 HIF-1α 在内的潜在靶基因 381 个。
[28]
酶-2，影响其睾丸功能 。Lai 等 [29] 发现，低氧可 HIF-1α 作为低氧状态下的特异性转录因子，参与
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