Page 142 - 《水产学报》2023年第1期

李晓晖，等 水产学报, 2023, 47(1): 019610

表 2 荧光定量 PCR 通用引物和特异性引物序列 的单一茎环结构，且成熟序列位于茎环结构上
Tab. 2 Universal primer and specific primer sequences for (图 1)。从 miRbase 数据库中获得不同物种的 miR-
RT-qPCR
17a-5p 成熟序列，发现 miR-17a-5p 的成熟序列长
引物名称 引物序列(5′→3′) 度为 22~24 nt，其中 位碱基序列高度一致，
primer name primer sequence (5′→3′) 1~22
miR-17a-5p F GCGCGCCAAAGTGCTTACAGTG 仅后 2 位碱基在不同物种中存在不同程度的缺失，
R GCAGGGTCCGAGGTATTC miR-17a-5p 在不同物种间具有高度保守性 (表 3)。
利用 软件构建不同物种 的前
U6 F TGCTCGCTACGGTGGCACA MEGA-X miR-17a-5p
体序列的系统进化树，鲢 miR-17 的前体序列与鲤
R AAAACAGCAATATGGAGCGC
科 (Cyprinidae) 鱼类首先聚为一支，其次与海水鱼
HIF-1α F GCACAGAGCCGAAGGAAGAAGG
类聚为一支，最后与两栖类、鸟类以及哺乳类聚
R GCAGGTAGGCGATTGTGAGACG
为一支 (图 2)。
Ethe1 F CAACCTCCCCAAACCTAAAAAA
2.2 鲢 在不同组织中的相对表达
R AAACCGACAAGAACAAACACTGAC miR-17a-5p
BPNT1 F TGGAGTCATCAATCAGCCCTTC 荧光定量表达分析发现，鲢 miR-17a-5p 在成
R GGTCACAAGTTTATTGCTATGGGA 鱼不同组织 (肝脏、心脏、脑和鳃) 中表达量存在

ddit4 F TCCACTCCAACATCTGACGCTCCT 差异，以肝脏组织为对照，miR-17a-5p 在心脏中
R ACCACTTCTTTGCACAACGCCTCT 的表达量最高 (P<0.05) (图 3)。
SGK1 F TCCAGCGTGAGAGGGTGTTT
2.3 miR-17a-5p 靶基因预测及功能分析
R GTGGTTGTGCCATTGGGTTC
利 用 MiRanda 和 qTar 软 件 进 行 miR-17a-5p
Rps6ka2 F TCCAGCGTGAGAGGGTGTTT
靶基因预测，得到共有的潜在靶基因 381 个。对
R GTGGTTGTGCCATTGGGTTC
获得的 381 个靶基因进行 GO 功能和 KEGG 通路
slc38a9 F GATTGGTGCGATGGTGGTCT
富集分析，在生物学过程水平，miR-17a-5p 靶基
R TGAATGCTGCTGTTCCTGTCTG
因主要显著富集在单有机体细胞过程、生物过程
Lrp5 F CCCTCAACTTCATCGCACCC
的调节、细胞发育过程等 GO Term (P<0.05)；在
R GGAGGAGGGTTGAGCATCTGT 细胞组分水平，靶基因主要富集在泛素连接酶复
seh1l F TCAGATGGTTGTTGGGGCGG 合体、线粒体内膜等 GO Term (P<0.05)；在分子
R TCAGTGGGTTGATTGGTGGAGT 功能水平，靶基因显著富集于泛素蛋白转移酶、氧
fzd3 F ATTACATCCATCGCACAACCCT 化还原酶、S-腺苷甲硫胺酸甲基转移酶等 GO Term
R CCTTCTCAACCAAACTAACGCC (P<0.05) (表 4)。KEGG 富集结果显示，miR-17a-
icmt F GTTACAGCCATCATCAACCCACG 5p 靶基因显著富集在硫代谢、mTOR 信号通路以
R CCCACAGAGAACCATCACCAGAC 及萜类骨架的生物合成 3 个通路上。此外，一些
与 低 氧 相 关 的 通 路 如
PCYOX1 F CAAGTTGGGCGAAGGGGTTT MAPK 信 号 通 路 、 FoxO
信号通路、HIF-1 信号通路等也发生了富集 (图 4)。
R TGTGCAGGTTAAGGGGGTGA
β-actin F TGAGAGGTTCAGGTGCCCAG 2.4 低 氧 胁 迫 减 弱 miR-17a-5p 对 其 靶 基 因
R TGTCAGCAATCCAGGGTAC HIF-1α 的抑制作用
低氧诱导因子是被鉴定到的低氧信号传导途
2 结果 径中最为关键的因子，而 HIF-1α 恰好是 miR-17a-
5p 381 个潜在靶基因中的一员。MiRanda 和 qTar
2.1 miR-17a-5p 序列保守性分析
软件的靶基因预测结果均显示 HIF-1α 与 miR-17a-
通过测序验证鲢 miR-17a-5p 序列后，通过 5p 存在靶向关系，miR-17a-5p 在其 3′UTR 上的结
UNAFold 网站预测其二级结构，发现其带有典型 合位点如图 5-a 所示。为了进一步得到验证，构

https://www.china-fishery.cn 中国水产学会主办 sponsored by China Society of Fisheries
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