Page 140 - 《水产学报》2023年第1期
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李晓晖，等                                                                 水产学报, 2023, 47(1): 019610

              研究也取得一定进展 。急性低氧胁迫下，在大                            头时，取样作为低氧组            [DO：(0.76±0.03) mg/L，
                                  [7]
              口黑鲈    (Micropterus salmoides) 肝脏中鉴定出   miR-     90 min]；当半数实验鱼身体失去平衡时，取样作
              130a-3p、miR-2 188-5p  和  miR-15b-5p  等  13  个参与  为半窒息组     [DO：(0.62±0.09) mg/L，110 min]；当
                                         [8]
              糖脂代谢的差异表达          miRNAs 。通过急性低氧和               半数实验鱼开始下沉且没有节律地开合鳃瓣时，
              复氧处理，发现团头鲂            (Megalobrama amblyceph-    取样作为窒息组       [DO：(0.27±0.06) mg/L，190 min]；
              ala) 中大量差异表达的        miRNA  参与   HIF-1  通路的      常氧对照组在实验期间保持正常溶解氧                     [(6.90±
                                                 [9]
              调控，进而影响能量代谢和细胞凋亡 。截止目                            0.04) mg/L]。一个玻璃缸作为一个重复，每组设
              前，低氧诱导因子是被鉴定到的低氧信号传导途                            置  3  个重复。取样后立即用          100 mg/L MS-222 麻
              径中最为关键的因子，低氧诱导因子介导的转录                            醉实验鱼，解剖后取肝脏、脑、心脏和鳃四个组
              激活反应是细胞感受低氧的最为关键的信号传导                            织，液氮速冻后放入–80 °C          冰箱储存，用于后续
              途径  [10-11] 。低氧信号传导途径在动物界非常保守，                   RNA  提取。实验方法均经中国水产科学研究院长
              低氧诱导因子       HIF-1α  与  HIF-1β  形成异源二聚体，         江水产研究所动物伦理委员会批准。
              与其下游基因的低氧反应元件                 (hypoxia response
                                                                1.2    miR-17a-5p  的序列分析、靶基因预测及功
              element，HRE) 结合，再在一些转录激活因子的                      能富集
              共同作用下，激活下游基因的表达，从而引起一
                                                                   通过   miRbase (https://www.mirbase.org/) 数据
              系列的生理、生化反应            [10, 12] 。近年来，miR-17  被
                                                               库获取斑马鱼 (Danio rerio，登录号：MI0001897)、
              发现可通过抑制低氧诱导因子                (hypoxia inducible
                                                               鲤 (Cyprinus carpio，登录号：MI0023342)、斑点
              factor 1α，HIF-1α) 来维持生理分解代谢和合成代
                                                               叉尾鮰 (登录号：MI0024524)、大西洋鳕 (Gadus
              谢的平衡 。
                      [13]
                                                               morhua， 登 录 号 ： MI0036194)、 红 鳍 东 方 鲀
                   基 于 前 期 鲢     (Hypophthalmichthys  molitrix)
                                                               (Fugu rubripes，登录号：)、青斑河鲀 (Tetraodon
              miRNA  测序发现，低氧胁迫下           miR-17a-5p  表达下
                                                               nigroviridis，登录号：MI0003232)、青鳉 (Oryzias
                [14]
              调 ，本研究通过对鲢的             miR-17a-5p  进行序列分
                                                               latipes，登录号：MI0019542)、大西洋鲑 (Salmo
              析，预测其靶基因并验证其与              HIF-1α  的靶向关系，
                                                               salar，登录号：MI0026535)、热带爪蟾 (Xenopus
              检测不同程度低氧胁迫下             miR-17a-5p  和其靶基因
                                                               tropicalis，登录号：MI0004803)、斑胸草雀 (Tae-
              在鲢肝脏、脑、心脏和鳃四个组织中的动态表达
                                                               niopygia guttata，登录号：MI0013784)、人 (Homo
              特征，为揭示低氧胁迫下鲢             miRNA  的表达与调控
                                                               sapiens，登录号：MI0000071)、小鼠 (Mus muscu-
              机制提供新见解。
                                                               lus， 登 录 号 ： MI0000687)、 倭 狐 猴  (Microcebus
               1    材料与方法                                      murinus， 登 录 号 ： MI0039918)、 白 颊 长 臂 猿
                                                               (Nomascus leucogenys，登录号：MI0040207)、穴
               1.1    实验材料与低氧处理
                                                               兔 (Oryctolagus cuniculus，登录号：MI0039225)、
                   实验所用鲢均由农业农村部鲢遗传育种中心                         山羊 (Capra hircus，登录号：MI0030648)、九带
              提供。实验开始前，将鱼放置在装有循环水系统                            犰狳 (Dasypus novemcinctus，登录号：MI0038909)、
              的水箱中暂养        2  周  [ 水温  (23.0±0.5) °C，溶解氧>     眼 镜 王 蛇  (Ophiophagus  hannah， 登 录 号 ：
              6 mg/L]。待其适应条件后，随机挑选体表无损伤                        MI0031372)、 树 鼩  (Tupaia  chinensis， 登 录 号 ：
              且 规 格 大 小 一 致     [ 体 长  (15.06±1.23)  cm， 体 重   MI0031174)、 蟒 蛇  (Python  bivittatus， 登 录 号 ：
              (53.64±4.84) g] 的鲢  120  尾，每  10  尾实验鱼放置         MI0030161)、 原 鸽  (Columba  livia， 登 录 号 ：
              于  1 个玻璃水缸     (50 cm×35 cm×30 cm) 中，用塑料         MI0029912) 和 原 鸡  (Gallus  gallus， 登 录 号 ：
              薄膜密封，使水体中的溶解氧自然消耗，并观察                            MI0001184) miR-17  的前体序列，并利用         MEGA-
              实验鱼的活动状况。实验期间使用哈希                   HQ40d  便     X  构建不同物种      miR-17  的系统发育树      [15] 。通过
              携式多参数仪表         (美国) 测定水温      [(23.5±0.2) °C]，  UNAFold  网站 (http://www.unafold.org/mfold/applic-
              pH (7.74±0.04) 和溶解氧含量。当大部分实验鱼浮                   ations/rna-folding-form-v2.php) 获 得  miR-17a 的 二

              https://www.china-fishery.cn                           中国水产学会主办    sponsored by China Society of Fisheries
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